DMF - Teses de Mestrado
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- Estudo da influência do exercício, da idade e da presença de lesões de osteocondrose nos níveis séricos de biomarcadores ósseos no cavalo Lusitano linha Alter RealPublication . Bernardes, Nuno Filipe Gomes; Dias, Graça Maria Leitão Ferreira; Ferreira, António José AlmeidaO presente estudo pretendeu avaliar a influência do exercício, da idade e da presença de lesões de osteocondrose (OC) nos níveis séricos de biomarcadores ósseos em cavalos de raça Lusitana, em particular numa população de garanhões Alter Real. Os biomarcadores ósseos constituem uma forma expedita e não invasiva de avaliar e monitorizar o metabolismo ósseo em várias espécies animais incluindo os cavalos. Alguns destes biomarcadores ósseos traduzem a actividade de deposição e formação de osso enquanto outros traduzem a actividade reabsorptiva neste mesmo tecido. Uma população de 50 garanhões de raça Lusitana, linha Alter Real, foi sujeita a um exame radiográfico sumário das articulações metacarpo- e metatarsofalângicas e também das articulações de ambos os tarsos para pesquisa de lesões de osteocondrose. A esses cavalos foi também recolhido sangue para poder avaliar os níveis séricos de biomarcadores de deposição/formação óssea, osteocalcina, fosfatase alcalina de especificidade óssea (FAO) e propeptídeo aminoterminal de procolagénio tipo-I (PINP), e de reabsorção óssea, telopeptídeo carboxiterminal de colagénio tipo-I (ICTP). Esta avaliação permitiu estudar diferentes grupos tendo em conta a presença ou a ausência de lesões de osteocondrose (grupo controlo – ausência de lesões vs. grupo OC – presença de lesões), a idade dos cavalos (grupo A - < 10 anos vs. grupo B - > 10 anos) e o regime de trabalho a que estavam sujeitos (grupo D – regime menos intenso vs. grupo T – regime mais intenso). Os procedimentos foram realizados num único momento no tempo não tendo sido sujeitos a reavaliações subsequentes. Os resultados encontrados permitiram verificar diferenças significativas (P<0,05) nos animais sujeitos ao regime de exercício mais intenso que apresentavam valores mais elevados de FAO quando comparados com os cavalos sujeitos ao regime menos intenso. Já na comparação entre grupos etários foi o ICTP que apresentou diferenças significativas (P<0,05) revelando valores mais elevados nos animais mais jovens. Nestes mesmos grupos também a osteocalcina revelou uma tendência (P=0,08) para apresentar valores mais baixos nos animais mais velhos. No que respeita à presença ou ausência de lesões de OC, e apesar de não se terem encontrado diferenças significativas nos níveis dos biomarcadores ósseos entre os grupos, importa referir que se observaram valores de prevalência total de cavalos afectados de 16% (n=8), sendo que 6% das lesões afectavam o tarso e 12% os boletos. Esta aparente incongruência de valores deve-se à existência de lesões tanto nos tarsos como nos boletos em pelo menos um cavalo. Este valor enquadra-se totalmente nas referências da literatura. Através deste trabalho é pois possível confirmar a utilidade dos biomarcadores ósseos na avaliação do metabolismo ósseo de cavalos em diferentes situações e sob influências variadas, sendo no entanto necessário realizar mais estudos para poder conhecer melhor a relação entre os factores implicados nas alterações metabólicas e a sua tradução em termos bioquímicos.
- Avaliação do enriquecimento ambiental da instalação de um jaguar no Jardim Zoológico de LisboaPublication . Santos, Márcia Isabel Monteiro; Rosa, Ilda Maria Neto Gomes; Carreira, Luís Miguel AlvesO Enriquecimento Ambiental é uma prática relativamente recente que surgiu no âmbito da conservação, com o objetivo de suscitar comportamentos naturais nos animais sob cuidados humanos, visando o seu bem-estar e preparação para serem devolvidos à natureza, caso estes apresentem fortes possibilidades de adaptação à vida selvagem. Consiste na modificação do ambiente que rodeia o animal, nomeadamente a instalação onde residem, e das suas práticas de maneio, usando as 5 categorias de enriquecimento ambiental: social, cognitivo, sensorial, alimentar e físico. Tem sido aplicada extensivamente nos Jardins Zoológicos pelo mundo, incluindo o Jardim Zoológico de Lisboa, local onde o estágio e estudo foram realizados. O espécime do estudo foi um Jaguar fêmea (Panthera onca) que tinha sido recebida no Jardim Zoológico recentemente, proveniente do Jardim Zoológico de Darthmouth, uma troca realizada conforme as normas e indicações da European Association of Zoos and Aquaria (EAZA). O estudo incidiu na avaliação do enriquecimento ambiental aplicado inicialmente na instalação que lhe foi alocada. A recolha de dados para a avaliação foi realizada com recurso a uma máquina fotográfica, caderno para anotações e a um smartphone com a aplicação Animal Behaviour Pro, disponível para a plataforma iOS, que permitiu registos comportamentais mais rápidos e precisos. Estes dados são automaticamente convertidos em tabelas de cálculo no computador, prontos para serem tratados estatisticamente com recurso a testes não-paramétricos. O programa utilizado para analisar os dados foi o RStudio. Com os dados recolhidos, foi possível concluir que o espécime está bem-adaptado à sua instalação e a realizar principalmente comportamentos naturais que seriam observados nos animais em liberdade. O enriquecimento ambiental aplicado era variado, desde a construção de estruturas de madeira, vegetação natural, introdução de especiarias como a canela, pinhas penduradas em ramos para estimular a audição, caixas de cartão e sacas de serapilheira manchadas de sangue e comida escondida na instalação. Estes estão portanto a cumprir os seus objetivos de estimular a realização de comportamentos naturais na Jaguar, contribuindo positivamente para o seu desenvolvimento e bem-estar.
- Disfunção cognitiva canina : perceção dos detentores e a sua repercussão no desfecho clínicoPublication . Costa, Ana Dixo Pinto Machado; Rosa, Ilda Maria Neto Gomes; Torres, João Pinheiro, tutorA disfunção cognitiva canina (DCC) provoca profundas alterações a nível cerebral 7 com graves consequências no bem-estar do animal e na relação estabelecida com o 8 detentor. Embora não exista ainda cura, sabe-se que o tratamento, realizado numa fase 9 precoce, permite atrasar a progressão da doença e, por vezes, melhorar o quadro clínico do 10 animal. Apesar do aumento generalizado dos cuidados prestados aos animais, a DCC 11 continua a ser gravemente subdiagnosticada, de acordo com a literatura. Questiona-se, 12 então, o papel do desconhecimento (desinformação) e incompreensão da doença por parte 13 dos detentores na falha de diagnóstico observada. Realizou-se um inquérito por questionário 14 com 272 respostas, e constatou-se que apenas cerca de 24% da amostra, já teria ouvido 15 falar da doença. Esta informação sobre a DCC proveio mais vezes da internet e outros 16 detentores (em 20 casos), do que de um médico veterinário (em 18 casos). Destaca-se 17 também que, alguns respondentes pertencentes à área médico veterinária, desconheciam a 18 DCC. Verificou-se ainda que o conhecimento sobre a doença, não facilitou no geral a 19 distinção entre sinais de DCC e do normal processo de envelhecimento, pelo que, se 20 depreende que a informação transmitida não é suficiente/adequada. Já ter tido cães, 21 também não beneficiou os respondentes que desvalorizaram mais vezes os sinais clínicos 22 de DCC. A agressividade perante os membros da casa foi o maior fator de procura por 23 atenção veterinária, seguido de desorientação e circling. As respostas, de ambos os 24 géneros, idades e profissão/formação foram muito homogéneas, diferindo relativamente à 25 desorientação (as mulheres procurariam mais vezes assistência médica) e no caso de 26 house soiling e resposta a comandos (os jovens tiveram maiores dificuldades em 27 reconhecer os sinais de doença). Na maioria das questões, os respondentes preferiram 28 referir o assunto numa próxima consulta, não marcando uma no imediato, levando ao 29 arrastar da situação do animal e podendo culminar no esquecimento ou habituação. 30 Demonstra-se assim a necessidade urgente de modificar este paradigma, aumentando a 31 informação divulgada sobre a doença junto dos médicos veterinários e, sobretudo dos 32 detentores permitindo-se oferecer aos animais um diagnóstico e tratamento adequado e 33 atempado.
- Notch and Wnt signaling interplay on regulation of early embryo developmentPublication . Batista, Mariana Raposo; Silva, Maria Elisabete Tomé Sousa; Costa, Luís Filipe Lopes daMammalian early embryo development requires action of a complex network of cell signaling pathways that coordinates cellular proliferation and differentiation events. Notch is a major regulator in embryonic and adult scenarios, also interplaying with other signaling pathways, such as Wnt. The objective of this work was to determine Notch signaling status in early embryo development and its influence on cellular differentiation and pluripotency maintenance, and on embryo competence to implant and develop to term. Additionally, the Notch/Wnt interplay was investigated in this scenario. Firstly, we analyzed individual embryo transcription of Notch components and their relation with transcription of pluripotency and differentiation gene markers (Sox2, Oct4, Klf4, Cdx2). Secondly, a pharmacological approach was used to induce Notch signaling (recombinant JAGGED1 and 2) and to inhibit Notch and/or Wnt signaling (DAPT and/or DKK1, respectively). Finally, embryos treated with DAPT and/or DKK1 were transferred to recipient females and implantation competency (at Day5 of gestation) and development to term (Day18) were evaluated. Results showed that transcription of Notch1-2, Jagged1-2 and Hes1 was highly prevalent and dynamic along stages of development. Transcription of Notch1, Notch2, Jagged2 and Hes1 correlated with each other and with that of Sox2, Oct4, Klf4 and Cdx2. In vitro embryo culture supplementation with JAGGED1 had no effect on embryo developmental kinetics, whereas supplementation with JAGGED2 abolished Jagged1 transcription, downregulated Cdx2 transcription and inhibited blastocyst hatching. Notch and Wnt had opposing effects on developmental kinetics, as Notch blockade retarded development and hatching, while Wnt blockade fastened it. We found evidences of Notch and Wnt interplay in early embryos as double blockade produced more severe phenotypes than expected by cumulative effects of single blockades. Notch and double blockade altered trophectoderm cell numbers and inner cell mass to trophectoderm ratio and all blockades altered transcription of Sox2, Oct4, Klf4 and Cdx2 throughout development. Implantation was unaffected by treatment, but Notch and double blockades affected the rate of Day18 developed fetuses. Notch blockade produced lighter and Wnt blockade heavier fetuses. Overall, results indicate that Notch is active in early embryo development where, together with Wnt, plays a significant role in controlling the pace of differentiation and proliferation of the blastocyst, ultimately affecting development to term.
- Deposição de colagénio na placenta equina : possível relação com a idade da égua e peso do poldroPublication . Silva, Ana Catarina Horta Santos Neto da; Dias, Graça Maria Leitão FerreiraEm égua idosas, o aumento das fibras de colagénio no endométrio predispõe à sub-fertilidade e infertilidade. Visto que, quando o colagénio está presente no endométrio equino também está no oviduto, propôs-se a hipótese de também poder existir na placenta e, desta forma, contribuir para uma diminuição do peso do poldro à nascença. Como tal, o objetivo principal deste estudo foi avaliar (quantitativamente e qualitativamente) a presença de fibras de colagénio na placenta equina e a sua relação com o aumento da idade da égua e com o peso do poldro. A placenta foi pesada imediatamente após a sua expulsão e o poldro foi pesado às 24h pós-nascimento. Foram recolhidas amostras do corno grávido, do corno não-grávido e do corpo da placenta de éguas mais novas com idades inferiores a 10 anos (Novas; n=7), e de éguas mais velhas, com idades entre os 10 e os 15 anos (Idosas; n=9), de diferentes raças. Os tecidos foram colocados em formaldeído a 4 % (para estudos histológicos) e em RNA Later (para determinação de transcrição e da proteína). A presença de colagénio na placenta foi avaliada através da quantificação de transcritos de COL1A1, COL1A2, COL3A1 e COL5A1 por PCR em tempo real, e de proteína total, indiretamente, através da concentração de hidroxiprolina. Além disso, foi realizada uma avaliação qualitativa histológica do colagénio dos tipos I e III em cortes de placenta corados com Picrosirius Red e observados ao microscópio ótico sob um feixe de luz polarizada. Foi também realizada a medição da espessura do tecido conjuntivo da placa corial no corno grávido da placenta equina. Os dados foram analisados por ANOVA a um fator seguido dos respetivos testes post-hoc ou pelo teste de correlação de Pearson (GraphPad Prism e Statistica 7). Houve um aumento dos níveis de mRNA de COL1A1, COL3A1 e COL5A1 e de hidroxiprolina no corno grávido de éguas idosas (≥ 10 anos; p<0,05). Além disso, a espessura do tecido conjuntivo da placa corial no corno grávido da placenta equina foi maior em éguas idosas quando comparada com éguas novas (p<0,05). Foi observada uma correlação positiva entre o peso do poldro e o peso da placenta (R = 0,7284; p=0,001), assim como, entre o peso do poldro e a idade da égua (R= 0,6596; p=0,005). Apesar de não ter sido encontrada uma correlação entre o colagénio total presente na placenta e a idade da égua ou o peso do poldro, a fibrose, que é caraterizada pelo aumento da deposição de fibras de colagénio, foi maior no corno grávido de placentas de éguas idosas, o que tem sido considerado um sinal de insuficiência placentária noutras espécies, com repercussões negativas no peso do recém-nascido.
- Variabilidade individual do sémen criopreservado em bodes de raça serpentinaPublication . Leites, Inês João Costa; Bettencourt, Carlos Manuel Varela; Silva, João Nestor das Chagas eO processo de criopreservação é responsável pela diminuição da qualidade seminal e torna mais clara a existência de uma variabilidade individual na qualidade do sémen descongelado. O principal objetivo do estudo foi analisar a variabilidade individual na criopreservação de sémen de bodes de raça Serpentina, no que diz respeito à congelabilidade dos seus ejaculados, através de uma avaliação subjetiva, de testes complementares e de uma avaliação objetiva. Descongelaram-se 40 palhinhas de sémen criopreservado obtidas a partir de ejaculados de 7 bodes, que foram examinadas por microscopia ótica para a avaliação da motilidade espermática progressiva (%) e foram realizados esfregaços para determinar a vitalidade e a percentagem de anisoespermia. Para avaliar a integridade das membranas plasmáticas dos espermatozoides, as amostras foram submetidas ao teste hipo-osmótico (HOST) e para avaliar o comportamento e resistência dos espermatozoides foram submetidas ao teste de termorresistência (TTR). Por último, foi realizada uma avaliação objetiva da cinética espermática através do sistema CASA. A percentagem de motilidade foi reduzida significativamente (p<0,001) de 80,88% no sémen fresco para 48,5% após a descongelação. Durante o estudo, os ejaculados foram classificados pelo nível de congelabilidade, de acordo com a sua motilidade pós descongelação: alto (>30%) e baixo (≤30%). Ejaculados com nível de congelabilidade alto apresentaram valores de motilidade (p<0,001), vitalidade (p<0,05) e de motilidade aos 120min do TTR (p<0.001) significativamente superiores aos de baixa congelabilidade. Na avaliação através do sistema CASA foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre os ejaculados de congelabilidade alta e baixa nos seguintes parâmetros: MOT (p<0,001), MOTP (p<0,001), VAP (p<0,001), VCL (p<0,001), VSL (p<0,05), ALH (p<0,05), RAPID (p<0,001), MED (p<0,001) e STATIC (p<0,001). Considerou-se, neste estudo, que um bode que produz sémen de alta qualidade e congelabilidade teria de apresentar uma motilidade pós-descongelação média >30% e covariância <0,1. Assim, apenas os bodes 2121 e 2808 foram considerados indivíduos produtores de sémen de qualidade superior. Porém, só foram encontradas diferenças estatisticamente significativas entre indivíduos quanto à vitalidade, aos 5min do TTR e ao BCF. Este estudo demonstrou não existir uma variabilidade individual marcada na qualidade do sémen criopreservado dos bodes estudados. No entanto, os elevados valores de desvio padrão demonstram que os ejaculados de um mesmo macho são bastantes variáveis nas suas características seminais. A classificação e comparação dos ejaculados pelo seu nível de congelabilidade mostraram ser apropriadas e revelaram diferenças importantes na qualidade do sémen descongelado de bode.
- Avaliação da evolução genética de um efetivo de bovinos Aberdeen-angusPublication . Antunes, Inês Oliveira Bernardo Marçal; Silva, João Nestor das Chagas e; Bragança, João Diogo Ferreira Bernardo (Tutor)RESUMO - A seleção genética é uma ferramenta fundamental na otimização da eficiência biológica e económica numa exploração de bovinos reprodutores, e desta forma, obter descendência com melhores performances produtivas e reprodutivas. A raça Aberdeen Angus tem vindo a apresentar uma crescente importância em Portugal, representando, atualmente, a segunda raça exótica com maior expressão no país. Com este trabalho pretendeu-se analisar os efeitos e evolução da seleção de algumas características de performance, dos animais nascidos na exploração AgriAngus. Para este efeito, utilizaram-se as estimativas de mérito genético calculadas pelo Breedplan para os animais da exploração e, por outro lado, realizou-se uma análise intra-exploração calculando se os parâmetros genéticos e a tendência genética ao longo do tempo, apenas para as características de peso ao nascimento, aos 200 dias, aos 400 dias e para o perímetro escrotal. A análise intra-exploração foi efetuada através do BLUP – Modelo Animal. Foram analisados dados de 481 animais inscritos na plataforma do Breedplan e, para a análise intra-exploração dados fenotípicos de 665 animais, compondo uma matriz de parentesco de 1686 animais. Os parâmetros genéticos estimados encontram-se, no geral, de acordo com o reportado na literatura citada. As tendências genéticas foram mais otimistas na estimativa realizada pelo Breedplan, porém, na maioria das características analisadas verificou-se uma melhoria nos valores do mérito genético dos animais, confirmando a evolução positiva, consequência do melhoramento genético através da seleção, em prática na exploração.
- Colagénio, eosinófilos e interleucina 33 no endométrio da burraPublication . Silva, Joana Aguiar Neves da; Dias, Graça Maria Leitão FerreiraOs eosinófilos e a fibrose no endométrio da burra podem influenciar a função reprodutiva. A classificação histopatológica do endométrio da égua de Kenney e Doig é usada na burra. A interação da IL-33 e dos eosinófilos tem sido associada à fibrose. Este estudo no endométrio de burra classificado segundo Kenney e Doig teve como objetivos: (i) quantificar a transcrição dos genes de colagénio tipo I (COL1), colagénio tipo III (COL3) e da interleucina 33 (IL-33) e sua correlação com o número de eosinófilos; bem como (ii) localizar e quantificar microscopicamente o COL1 e COL3. O número de eosinófilos e neutrófilos diminuiu com a fibrose (P < 0,05). Os transcritos de IL-33 tenderam a aumentar da categoria IIA para III. Houve uma tendência para uma correlação positiva entre o número de eosinófilos e transcritos de IL-33 na categoria IIA (ρ = 0,7714; P = 0,055). A área de COL1 e COL3 e o número de neutrófilos apresentaram uma correlação positiva e negativa, respetivamente. O facto do COL3 se localizar maioritariamente sob o epitélio de superfície e extrato compacto em todas as categorias de endométrio parece não ter um efeito nocivo na implantação embrionária e explicar a maior longevidade reprodutiva nesta espécie animal.
- Ilustração científica e a sua importância na descrição de um estudo de cirurgia reconstrutiva após rinectomia total em gatoPublication . Veiga, Marta Duarte da; Carreira, Luis Miguel Alves; Melo, Graça Maria Alexandre Pires Lopes deILUSTRAÇÃO CIENTÍFICA E A SUA IMPORTÂNCIA NA DESCRIÇÃO DE UM ESTUDO DE CIRURGIA RECONSTRUTIVA APÓS RINECTOMIA TOTAL EM GATO - Com o aparecimento da fotografia digital o ilustrador científico tem sentido uma nova necessidade de demonstrar a importância da sua atividade. No momento de aprendizagem de processos tão exigentes e complexos como são os procedimentos cirúrgicos, as referências visuais são um recurso inestimável. Tendo em conta que as fotografias de estruturas anatómicas podem ser difíceis de interpretar mesmo para cirurgiões experientes, as ilustrações médicas servem de ponte entre o que é factualmente observável e o que desejavelmente se pretendia observar para fins de consolidação cognitiva. O carcinoma das células escamosas é uma das causas mais frequentes da perda da integridade do plano nasal no gato. Como solução para as consequências da remoção cirúrgica deste tumor foi pensado o uso de uma prótese nasal. Este projeto teve como objetivo estudar a possibilidade de descrever através do desenvolvimento de ilustrações científicas o complexo procedimento cirúrgico de implantação de uma prótese nasal após rinectomia total por carcinoma das células escamosas em gato. Para esse fim, foi feito o registo fotográfico da implantação do modelo preliminar da prótese nasal em cadáver de gato. A informação recolhida nessas fotografias serviu de base para a realização das ilustrações que documentam esta cirurgia e servem de auxílio visual para o cirurgião veterinário. A ilustração científica apresenta algumas limitações, a principal é ser fruto da perceção de um indivíduo, e como tal suscetível aos erros deste. Apesar disso, mostra ser de grande valor ao permitir a transição entre diferentes níveis de abstração que torna a compreensão de procedimentos complexos mais acessível, preenchendo as lacunas na descrição textual dos mesmos.
- A epigenética e o colagénio em placentas de éguas jovens e velhaPublication . Vasconcelos, Manuel Maria Batalha Graça de Almeida e; Dias, Graça Maria Leitão Ferreira; Bliebernicht, Miguel Louro (Tutor)O desenvolvimento placentário depende grandemente do ambiente intrauterino. Na égua, a plasticidade da placenta, que já foi descrita em situações fisiológicas e patológicas, influencia profundamente o desenvolvimento fetal. Em geral, éguas mais velhas produzem poldros mais pesados e com uma maior deposição de colagénio, sobretudo no corno grávido da placenta. Em humanos, a regulação epigenética é fundamental para o desenvolvimento e função placentária, bem como em situações de fibrose. O objetivo principal foi avaliar a possível relação entre a modelação da metilação de DNA e a deposição de colagénio na placenta equina, em função da idade materna. As amostras foram recolhidas de diferentes porções da placenta (corno grávido, não grávido e corpo da placenta) de éguas jovens (n=10; 4-6 anos) e velhas (n=10; 12-18 anos), logo após o parto, tendo sido examinadas e pesadas. Através de qRT-PCR, os níveis de transcrição de mRNA foram quantificados para os genes COL1A1, COL3A1, DNMT1, DNMT3A e DNMT3B. A determinação quantitativa dos colagénios do tipo I (COL I) e III (COLIII) foi realizada pelo método de ELISA. Nas éguas velhas em comparação com as éguas jovens, os níveis de mRNA de COL1A1 e COL3A1 foram superiores no corno grávido e não grávido ...