DMF - Teses de Mestrado
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- Qualidade e estabilidade oxidativa da carne proveniente de frangos alimentados com dietas com elevado teor de spirulina per se ou extrudida e suplementação com enzimas exógenasPublication . Ferreira, Joana Inês Henriques; Prates, José António Mestre; Costa, Mónica Mendes daA crescente procura por alimentos, impulsionada pelo aumento da população, exige a busca por fontes proteicas alternativas e sustentáveis. Assim, torna-se essencial encontrar alternativas viáveis para o bagaço de soja, garantindo a segurança alimentar e reduzindo impactos ambientais. Este estudo avaliou o efeito da inclusão de 15% de Espirulina (Limnospira platensis) extrudida e suplementada com enzimas na dieta de frangos de carne, focando na qualidade nutricional e estabilidade oxidativa da carne. O ensaio teve a duração de 35 dias e envolveu 120 frangos machos com 1 dia de idade, distribuídos em quatro grupos experimentais, cada um com 10 aves: controlo (CTR) com dieta basal de soja e milho; 15% de Espirulina (SP); 15% de Espirulina extrudida (SPEX); e 15% de Espirulina extrudida com uma mistura enzimática, composta por 0,20% de extrato de pancreatina suína e 0,01% de lisozima (SPEZ). A suplementação com Espirulina iniciou-se no 21º dia e foi mantida até o abate, no 35º dia. Foram analisados a oxidação lipídica, o poder antioxidante, o perfil lipídico e os pigmentos, utilizando métodos espectrofotométricos (UV e visível) e cromatográficos (GC-FID e HPLC-DAD/FD) em amostras de carne de peito e coxa. A análise estatística foi realizada com o software SAS e a unidade experimental foi a gaiola. A carne dos frangos suplementados com Espirulina apresentou pH semelhante ao grupo controlo (p=0,166), mas diferenças significativas no parâmetro b* da cor (CIELAB) (p<0,001). A adição de Espirulina não alterou significativamente os níveis de oxidação lipídica (p=0,733). No entanto, a composição do perfil lipídico variou entre os grupos, com um aumento nos ácidos gordos polinsaturados e saturados em relação ao controlo (p<0,001), o que melhorou os rácios nutricionais (n-6/n-3 e PUFA/SFA) de ácidos gordos. Conclui-se que a inclusão de Espirulina extrudida, associada à suplementação enzimática, mitiga os efeitos negativos sobre a digestibilidade, promovendo melhor aproveitamento nutricional sem prejudicar a qualidade da carne
- VIP neuroepithelial circuit in immunity and metabolismPublication . Pereira, Maria Madalena Ramos; Fernandes, Henrique Veiga; Duarte, António José de FreitasABSTRACT - In recent years, a multitude of studies have highlighted the coexistence of immune and neuronal cells in shared anatomical locations, where they synergistically interact to form neuroimmune cell units...
- A placenta equina : genes reguladores da matriz extracelular e da vascularizaçãoPublication . Santos, Maria Inês Lino Monteiro dos; Silva, Maria Elisabete Tomé Sousa; Dias, Graça Maria Leitão FerreiraA placenta desempenha um papel preponderante no desenvolvimento e crescimento fetal, apresentando elevada capacidade de adaptação às necessidades fetais. Os mecanismos de adaptação englobam alterações estruturais da barreira placentária com o objetivo de aumentar a eficiência das trocas feto-maternas. Em éguas, o aumento da idade materna e paridade está associado a uma maior deposição de colagénio na matriz extracelular placentária e maior vascularização, o que se reflete no aumento de peso da placenta e do feto. Desta forma, para compreender os mecanismos moleculares que suportam estas alterações estruturais, o objetivo da presente dissertação foi estudar a expressão de enzimas reguladoras da quantidade de colagénio, tais como as metaloproteinases de matriz MMP-2 e MMP-9 e respetivos inibidores TIMP-1 e TIMP-2, assim como dos fatores angiogénicos VEGF A, VEGFR-1 e VEGFR-2. Para tal, utilizaram-se membranas fetais recolhidas após expulsão de éguas primíparas e multíparas com idades compreendidas entre os 5 e os 17 anos (n=17). Pretendeu-se, identificar a diferença de regulação entre cornos placentários (grávido e não grávido) e a sua relação com a idade materna e a paridade. Deste modo, foi utilizada a técnica de RT-qPCR para quantificação da transcrição dos genes que codificam estas proteínas. A técnica de imunohistoquímica permitiu comprovar a expressão proteica no tecido e identificar as células responsáveis pela sua produção. No presente estudo, não se observou qualquer relação entre a transcrição dos genes MMP2, MMP9, TIMP1, TIMP2, VEGFA, VEGFR1, VEGFR2 com a idade materna e a paridade. No entanto, os resultados sugerem uma maior transcrição de MMP2 (P=0,002), TIMP1 (P=0,022) e TIMP2 (P < 0,001) no corno grávido comparativamente ao não-grávido. A transcrição de MMP2 foi superior à de MMP9 (P < 0,001) e está correlacionada positivamente com a TIMP2, sugerindo que o equilíbrio MMP-2/TIMP-2 tem relevância biológica na remodelação da matriz extracelular placentária. As proteínas MMP-2, MMP-9, TIMP-1 e VEGF-Aforam localizadas no citoplasma das células do trofoblasto, enquanto a TIMP-2 foi observada no estroma da membrana alantocoriónica. Ainda existe um longo caminho a percorrer para decifrar o papel destas enzimas proteolíticas na membrana alantocoriónica equina. No entanto, a sua expressão diferenciada nas estruturas placentárias, nesta fase da gestação, sugere uma relação com a remodelação da barreira placentária e com a expulsão das membranas fetais
- Avaliação do impacto de uma alimentação rica em quinoa, pescado e óleo de peixe no perfil lipídico e acumulação de DHA no fígado de murganhos com propensão para desenvolver doença de AlzheimerPublication . Dias, Beatriz Rosário; Bandarra, Narcisa Maria Mestre; Bispo, Ana Maria Cardoso Lourenço Gomes; Afonso, Fernando Ribeiro AlvesA doença de Alzheimer (AD) é uma doença neurodegenerativa que resulta na diminuição das funções cognitivas. Dada a forte correlação entre a AD e níveis neuronais reduzidos de ácido docosahexaenóico (DHA), o enriquecimento do cérebro por via nutricional pode contribuir para o abrandamento do declínio cognitivo. Considerando a relevância do fígado no metabolismo lipídico, este estudo teve como objetivo avaliar o impacto de uma alimentação rica em DHA no perfil lipídico e acumulação deste ácido gordo no fígado de murganhos. Deste modo, 32 murganhos transgénicos 5xFAD (modelo animal para a AD) foram divididos em quatro grupos. Cada grupo foi alimentado com uma dieta diferente: Controlo (C) (dieta padrão AIN-93M); Cavala (CV) (AIN-93M suplementada com 10% cavala); Quinoa (Q) (AIN-93M com 5% quinoa); e Cavala+Quinoa (CVQ) (AIN-93M com 10% cavala e 5% quinoa). A fração lipídica hepática destes murganhos foi caracterizada em termos do teor de lípidos totais, perfil de classes de lípidos, e distribuição de ácidos gordos nos lípidos totais e nas classes de lípidos mais relevantes. Assim, se as diferentes dietas não impactaram o teor de lípidos totais, no que se refere ao perfil das classes de lípidos, verificou-se que os grupos CV e CVQ registaram tendencialmente (p<0,05) maiores teores relativos de fosfolípidos (27,6 ± 5,9% e 29,9 ± 5,0% dos lípidos totais, respetivamente) e de 1,3-diacilgliceróis+colesterol (15,9 ± 2,5% e 14,0 ± 2,8%). Em contrapartida, o grupo Q distinguiu-se com os maiores níveis de triacilgliceróis (TAG), com cerca de 37,5 ± 6,9%. Os grupos Q (15,9 ± 2,7%) e CVQ (15,5 ± 2,9%) registaram uma diminuição dos ácidos gordos livres (FFA) face ao grupo C (22,6 ± 6,7%). A adição da cavala às dietas resultou na redução dos ácidos gordos polinsaturados n-6, e no aumento dos ácidos gordos saturados e polinsaturados n-3. Este último grupo foi impulsionado pelo ácido eicosapentaenóico (EPA) e, em particular, pelo DHA, cujos teores se destacaram nos grupos CVQ (12,2 ± 2,8%) e CV (7,9 ± 3,3%). Quanto ao perfil de ácidos gordos das principais classes de lípidos, as maiores diferenças foram registadas nos FFA e TAG, cujos teores de DHA foram mais elevados nos grupos CV (2,9 ± 1,2% e 7,5 ± 3,6%, respetivamente) e CVQ (3,0 ± 1,0% e 8,2 ± 2,1%, respetivamente). Assim, os resultados apontam para um possível benefício na adição de quinoa à cavala com aumento de DHA nos teores hepáticos. A suplementação permitiu uma maior disponibilidade de DHA sob a forma livre e, como tal, disponível para ser transportado ou incorporado noutras classes de lípidos, sugerindo uma incorporação de DHA excedente nos TAG em resposta à suplementação com cavala
- Epigenetic changes in equine myometrium at different stages of endometrosisPublication . Silva, Beatriz de Oliveira Celeiro e; Szóstek-Mioduchowska, Anna; Dias, Graça Maria Leitão FerreiraA reduction in the contractile activity of the myometrium can result in insufficient cleaning of the uterine lumen and the persistence of endometritis, leading to endometrosis. Studies in humans and other species point out to an important role for epigenetic mechanisms in gene expression regulation in the myometrium. However, in mares, there is a lack of information regarding the expression of enzymes responsible for DNA methylation (DNMTs) and demethylation (TETs) and the importance of these mechanisms. The main objective of this work was to determine the mRNA expression of these enzymes and explore the potential role of epigenetic mechanisms in the expression of genes encoding oxytocin (OXTR) and PGF2α (PTGFR) receptors in the myometrium of mares with endometrosis. Myometria were used in the midluteal (n=23) and follicular (n=20) phases of the estrous cycle. The material was grouped according to the corresponding endometrial classification (Kenney and Doig, 1986): category I (without pathological changes), IIA (mild endometrial fibrosis and/or inflammation), IIB (moderate endometrial fibrosis) and III (extensive endometrial fibrosis). Using qPCR method, the expression of DNMTs (DNMT1, DNMT3A, DNMT3B), TETs (TET1, TET2, TET3) and the expression levels of OXTR and PTGFR in the myometrium were determined. Using the bisulfite DNA pyrosequencing method, quantitative analysis (%) of DNA methylation was performed at specific sites (CpG islands) of two regions (exon 1 and 2) of OXTR gene. PTGFR did not have CpG islands and, thus, could not be analyzed. DNMT1 mRNA expression increased in myometrium in category IIA compared to category I in the follicular phase of the estrous cycle (P<0.05). The expression of TET2 mRNA was upregulated in the myometrium in categories I and IIB in the midluteal phase, compared to the follicular phase of the estrous cycle, also showing a positive regulation in category IIB compared to category I, in both phases (P <0.05). TET3 mRNA expression was increased in the myometrium in category IIA compared with category I in the follicular phase and was upregulated in category IIB in the follicular phase when compared with the midluteal phase of the estrous cycle (P<0.05). On the other hand, expression levels of OXTR and PTGFR and the global methylation (%) of OXTR in CpG islands did not show any significant differences between categories. However, an increase in DNA methylation was documented at position 6 of exon 2 of OXTR. The results suggest the potential regulatory role of epigenetic mechanisms in gene expression in the myometrium, related to changes in uterine contraction in mares with endometrosis
- The role of IL-12 in the pathogenesis of endometrosis in marePublication . Guerreiro, Mafalda Ramos Alves Raio e; Szóstek-Mioduchowska, Anna; Torres, Ana Catarina Belejo MóraABSTRACT - THE ROLE OF IL-12 IN THE PATHOGENESIS OF ENDOMETROSIS IN MARE - Equine endometrosis is a chronic degenerative uterine condition. It is characterized by fibrotic processes developing around the endometrial glands and stroma, in which the involved processes can be active or inactive. The severity of endometrial fibrosis is graded according to four categories: Category I (no fibrosis), followed by IIA, IIB, and III, which indicate mild, moderate, and severe fibrosis and inflammation. Endometrosis is a significant contributor to mare infertility, resulting in financial loss for horse owners globally, including those in Portugal. Although the pathogenesis of endometrosis is multifactorial, our study specifically investigated the potential role of interleukin (IL)-12. In a recent study, which focused on transcriptomic profiling of mare endometrium, changes in the expression of genes associated with interleukin (IL)-12 signaling and production in fibroblasts at different stages of endometriosis were demonstrated, identifying IL-12 as a potential player in the development of endometrial fibrosis. Interleukin 12 is a proinflammatory cytokine synthesized and released by macrophages, monocytes, dendritic cells, and B cells that participates in both cellular and humoral immune responses. This cytokine is composed of two covalently linked subunits (IL-12a(p35) and IL-12b(p40)). The purpose of the current study was to: (i) evaluate the mRNA expression of IL-12 subunits (IL-12p35, IL-12p40) and its receptors (IL-12RBeta1 e IL-12RBeta2), in mare endometria (n=77) from categories I, IIA, IIB, and III at the mid-luteal phase (MLP) and follicular phase (FP) of the estrous cycle; as well as (ii) the effect of IL-12 on the mRNA expression of fibrotic markers, such as: collagen COL1A1 and COL3A1, fibronectin (FN1), lysyl oxidase like 2 (LOXL2), α-smooth muscle actin (α-SMA), matrix metalloproteinases (MMP) 2, 3 and 9, and tissue inhibitor of metalloproteinases (TIMP)1 and 2 in endometrial fibroblasts (n=6); and (iii) the effect of IL-12 on fibroblast proliferation (n=6). Real-time PCR was performed on endometrial samples to determine mRNA expression of IL-12 components and receptors. The transcriptional evaluation of fibrotic markers was performed by qPCR in endometrial explants after the treatment with IL-12 (10 ng/ml) for 48 and 96h. In Category IIB endometria, the mRNA expression of IL-12RBeta2 was up-regulated in the MLP, compared to FP of the estrous cycle, and IL-12 treatment increased COL1A1, COL3A1,Alfa-SMA, MMP3, and -9 mRNA expression in mare endometrial fibroblasts cultured in vitro after 96h (p<0.05). Moreover, fibroblast proliferation was decreased in response to IL-12 treatment after 96h (P<0.001). The findings from the current study indicate that IL-12 has a direct impact on the expression of fibrotic markers in endometrial fibroblasts and fibroblast proliferation. It suggests a correlation between IL-12 and endometrosis development through the increased ECM components and MMP expression associated with fibrogenesis
- The potential of ABT-263 as a therapeutic agent in spinal cord injury-induced peripheral pathologyPublication . Monteiro, Mariana Antão Ventura; Saúde, Maria Leonor Tavares; Correia, Jorge Manuel de Jesus; Martins, Isaura Vanessa AntunesSpinal cord injury (SCI) is a serious neurological condition characterized by motor and sensory impairments, often associated with the induction of peripheral secondary conditions. There are two main causes identified for this peripheral pathology: the severance of the sympathetic nervous system and its supraspinal control; and a systemic and chronic inflammatory response. The elimination of SCI-induced senescent cells using the senolytic ABT-263 is responsible for significant motor, sensory and bladder improvements. These are also correlated with the reduction of detrimental cytokines, chemokines and senescent-associated secretory phenotype (SASP) factors. In our study, we hypothesized that the accumulation of SASP factors in the injured spinal cord could be responsible for its systemic spread and induction of senescence, SASP and, consequently, pathology in peripheral organs. As ABT-263 is beneficial for spinal cord repair outcome, we wanted to address if its effect was sustained in the periphery, and, therefore, attenuate secondary conditions. We evaluated the cytokine profile of the spinal cord, liver and bladder from T9 SCI mice taken from vehicle- and ABT-263-treated animals at different days post-injury (dpi). In addition to this, the histopathology and senescence profile were evaluated using H&E, and other special stainings, including SA-b-gal, respectively, as well as immunohistochemistry to assess inflammation. Image analysis and quantifications were done using QuPath. Our results showed a chronic induction of pro-inflammatory factors in the spinal cord at 30 dpi and a loss of effectiveness of ABT-263 compared with the 15 dpi. In the liver at 15 dpi, inflammatory cytokines and pro-fibrotic factors were upregulated with SCI, however, ABT-263 was not successful in decreasing their expression. At the same time, an increase in the number of senescent cells was observed in the animals treated with ABT-263 suggesting some degree of hepatotoxicity. This was onfirmed by an upregulation of pro-fibrotic and proinflammatory factors in the liver of ABT-263-treated animals at 30 dpi. Notwithstanding, at 15 dpi histopathology did not yet show significant pathological alterations. The spleen appeared to not be affected at this injury level. The bladder also revealed a chronic inflammatory and pro-fibrotic microenvironment and phenotype. However, the beneficial effects of ABT-263 were only observed at 30 dpi, suggesting an intermediate modulation by ABT-263 between 15 and 30 dpi. In conclusion, there is no irrefutable evidence that SASP becomes systemic and is responsible for the induction of senescence and pathology in other organs after SCI, at least at 15 dpi. Further studies are warranted
- Avaliação do corpo lúteo de éguas recetoras de embriões e sua relação com a progesteronaPublication . Rosa, Catarina Dias; Dias, Graça Maria Leitão Ferreira; Bliebernicht, Miguel Louro (Tutor)RESUMO - Um programa de transferência embrionária (TE) em equinos tem extrema importância por permitir uma rápida disseminação genética de animais de elevado valor. Para além da sincronia entre éguas dadoras e recetoras, alguns outros parâmetros devem ser considerados para uma melhor caracterização da aptidão das éguas enquanto recetoras e consequente seleção das mesmas. O presente estudo incidiu, deste modo, numa avaliação reprodutiva das éguas recetoras, nomeadamente de parâmetros relacionados com o corpo lúteo (CL) e a sua função, incluindo o estudo do perfil plasmático de progesterona (P4). Como objetivos principais, pretendeu-se validar um novo método para a quantificação da concentração plasmática de P4 em éguas, bem como confirmar o uso dos parâmetros avaliados relativamente ao CL (estrutura, vascularização e função endócrina), como critérios de inclusão ou exclusão de determinada égua recetora no programa de TE, e sua influência nos resultados de gestação. As éguas recetoras (n = 14) foram submetidas a uma avaliação reprodutiva no dia da TE (ET+0) e outra avaliação na altura do diagnóstico de gestação (ET+4). As avaliações inerentes aos dois momentos estudados englobaram o exame do trato genital feminino, por palpação transretal e por ultrassonografia, que permitiram recolher dados relativos ao tónus do cérvix e do útero e às dimensões e vascularização do CL. Simultaneamente, foi realizada uma colheita de sangue da veia jugular para posterior quantificação da concentração plasmática de P4. Os resultados apresentados demonstraram uma forte correlação entre os dois métodos de quantificação de P4 utilizados (p < 0,05). Quando as éguas foram separadas em éguas gestantes ou não gestantes, não foram encontradas diferenças estatísticas para quaisquer dos parâmetros, pelo que não foi possível confirmar o seu uso como critérios de seleção das éguas (p > 0,05). Em relação à concentração plasmática de P4, foram observados valores superiores nas éguas mais novas (p < 0,05). Porém, esta diferença etária não teve qualquer efeito nos resultados de gestação (p > 0,05). Concluiu-se ainda, que não existiu uma associação dos parâmetros morfométricos e vasculares do CL com a sua função endócrina, visto não terem sido verificadas quaisquer correlações entre as dimensões do CL e a concentração de plasmática de P4, nem entre a vascularização lútea e a concentração de P4 (p > 0,05
- A epigenética e o colagénio em placentas de éguas jovens e velhaPublication . Vasconcelos, Manuel Maria Batalha Graça de Almeida e; Dias, Graça Maria Leitão Ferreira; Bliebernicht, Miguel Louro (Tutor)O desenvolvimento placentário depende grandemente do ambiente intrauterino. Na égua, a plasticidade da placenta, que já foi descrita em situações fisiológicas e patológicas, influencia profundamente o desenvolvimento fetal. Em geral, éguas mais velhas produzem poldros mais pesados e com uma maior deposição de colagénio, sobretudo no corno grávido da placenta. Em humanos, a regulação epigenética é fundamental para o desenvolvimento e função placentária, bem como em situações de fibrose. O objetivo principal foi avaliar a possível relação entre a modelação da metilação de DNA e a deposição de colagénio na placenta equina, em função da idade materna. As amostras foram recolhidas de diferentes porções da placenta (corno grávido, não grávido e corpo da placenta) de éguas jovens (n=10; 4-6 anos) e velhas (n=10; 12-18 anos), logo após o parto, tendo sido examinadas e pesadas. Através de qRT-PCR, os níveis de transcrição de mRNA foram quantificados para os genes COL1A1, COL3A1, DNMT1, DNMT3A e DNMT3B. A determinação quantitativa dos colagénios do tipo I (COL I) e III (COLIII) foi realizada pelo método de ELISA. Nas éguas velhas em comparação com as éguas jovens, os níveis de mRNA de COL1A1 e COL3A1 foram superiores no corno grávido e não grávido ...
- Ilustração científica e a sua importância na descrição de um estudo de cirurgia reconstrutiva após rinectomia total em gatoPublication . Veiga, Marta Duarte da; Carreira, Luis Miguel Alves; Melo, Graça Maria Alexandre Pires Lopes deILUSTRAÇÃO CIENTÍFICA E A SUA IMPORTÂNCIA NA DESCRIÇÃO DE UM ESTUDO DE CIRURGIA RECONSTRUTIVA APÓS RINECTOMIA TOTAL EM GATO - Com o aparecimento da fotografia digital o ilustrador científico tem sentido uma nova necessidade de demonstrar a importância da sua atividade. No momento de aprendizagem de processos tão exigentes e complexos como são os procedimentos cirúrgicos, as referências visuais são um recurso inestimável. Tendo em conta que as fotografias de estruturas anatómicas podem ser difíceis de interpretar mesmo para cirurgiões experientes, as ilustrações médicas servem de ponte entre o que é factualmente observável e o que desejavelmente se pretendia observar para fins de consolidação cognitiva. O carcinoma das células escamosas é uma das causas mais frequentes da perda da integridade do plano nasal no gato. Como solução para as consequências da remoção cirúrgica deste tumor foi pensado o uso de uma prótese nasal. Este projeto teve como objetivo estudar a possibilidade de descrever através do desenvolvimento de ilustrações científicas o complexo procedimento cirúrgico de implantação de uma prótese nasal após rinectomia total por carcinoma das células escamosas em gato. Para esse fim, foi feito o registo fotográfico da implantação do modelo preliminar da prótese nasal em cadáver de gato. A informação recolhida nessas fotografias serviu de base para a realização das ilustrações que documentam esta cirurgia e servem de auxílio visual para o cirurgião veterinário. A ilustração científica apresenta algumas limitações, a principal é ser fruto da perceção de um indivíduo, e como tal suscetível aos erros deste. Apesar disso, mostra ser de grande valor ao permitir a transição entre diferentes níveis de abstração que torna a compreensão de procedimentos complexos mais acessível, preenchendo as lacunas na descrição textual dos mesmos.