DSA - Teses de Mestrado
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- Precision medicine for canine lymphoma : identification of novel and potent cytotoxic compounds for conjugation into an antibody-drug conjugatePublication . Pedrosa, Rita da Silva O’Neill; Silva, Frederico Nuno Castanheira Aires da; Neves, Solange Judite Roque Coelho Alves GilABSTRACT - Oncologic diseases have a significant impact on both animal and human health. Canine lymphoma is the most common hematologic malignancy and shares several similarities with human non-Hodgkin lymphoma. Various therapeutic strategies exist for treating canine lymphoma, but chemotherapy remains the primary treatment in most cases. However, this modality often fails to achieve optimal treatment outcomes. Patients undergoing chemotherapy may experience side effects due to the systemic toxicity of the drugs used, and many develop drug resistance, leading to refractory or relapsed cases. Therefore, it is crucial to invest in innovative therapeutic strategies for canine lymphoma. In human medicine, the incorporation of immunotherapies into treatment protocols for non-Hodgkin lymphoma has shown promising results. Monoclonal antibodies conjugated with cytotoxic payloads (ADCs–Antibody-drug conjugates) are an example of an immunotherapy modality that has shown promising results. Previous studies conducted by the Microbiology and Immunology Laboratory (FMV ULisboa) have demonstrated the efficacy of an ADC, which utilised the SN-38 payload, against canine lymphoma cells. Building on this, the present study aimed to identify other compounds with different mechanisms of action and high potency as promising candidates for the development of innovative ADCs for canine lymphoma treatment. A panel of eight molecules was selected and tested in two canine lymphoma cell lines (CLBL-1 and 17-71). Microtubule inhibitors (MMAF, MMAE, and DM1) and targeted protein degraders (MS4078, DT2216, NX-2127, ARV-825, and ARV-771) were chosen. The cytotoxicity assays revealed a range of IC50 values (half-maximal inhibitory concentration), with the three most potent compounds (MMAE, DM1, and ARV-825) showing IC50 values between 380 pM and 67.41 nM. In addition to assessing their individual potency, the synergistic effects of combining SN-38, MMAE, and ARV-825 were evaluated. Mathematical models applied to combination assays demonstrated that the combination of SN-38 with ARV-825 exhibited significant synergism. The results obtained enabled the selection of extremely potent cytotoxic molecules with different mechanisms of action, which could be conjugated into innovative ADCs, contributing to the development of a novel class of therapeutic molecules against canine lymphoma
- Estudo de caso do surto de leptospirose que ocorreu no Centro de Recolha Oficial de Animais de SantarémPublication . Duarte, Débora Neto; Cruz, Margarete Sofia da Silva; Rosa, Ilda Maria Neto GomesDecorrente do surto de leptospirose que aconteceu no Centro de Recolha Oficial de Animais de Santarém (CROAS), entre os meses de abril e julho do ano de 2024, realizou-se um estudo de caso que teve como objetivo caraterizar a população de canídeos infetados com Leptospira spp, assim como identificar possíveis fatores de risco que possam ter contribuído para a ocorrência deste surto e alertar para o impacto que esta doença pode ter a nível da saúde pública em contexto de medicina de abrigo. Os cães do CROAS foram diagnosticados a partir de imunofluorescência para deteção de IgG e/ou IgM, sendo que foram diagnosticados 22 cães com leptospirose, dos quais 18 (81,8%) eram machos e 4 (18,2%) fêmeas. Não foi realizado nenhum outro exame complementar de diagnóstico. Os sinais clínicos mais frequentes foram hematoquézia (40,9%) e fezes com muco (40,9%). Apenas os animais positivos no teste foram sujeitos a tratamento antimicrobiano com doxiciclina, com uma taxa de sucesso terapêutico de 95,5%. Dos quatro funcionários presentes no CROAS nesse período, dois contraíram a doença (50%), sendo que um precisou de internamento prolongado devido à gravidade do quadro clínico. Identificou-se como fator de risco os cães estarem alojados nas boxes interiores ao invés das exteriores, pátio e cercados (p=0,043; OR=3,47). Sugerindo uma maior probabilidade de contacto com poças de água ou escorrências contaminadas com urina de cães infetados ou urina de roedores, portadores assintomáticos, ou ambas. Este estudo de caso revela a importância da adoção de rigorosas medidas de biossegurança interna e externa em Medicina de Abrigo, na prevenção de zoonoses num contexto de “Uma Saúde”
- Pesquisa e caracterização de Escherichia coli e Salmonella spp. de Bubulcus ibis, Ciconia ciconia e Erinaceus europaeus de um Centro de Recuperação de Animais SelvagensPublication . Santos, Sofia Simões; Mena Casero, María Victoria; Oliveira, Maria Manuela Castilho Monteiro deA resistência antimicrobiana (RAM) constitui uma ameaça cada vez maior à saúde pública, sendo que a fauna selvagem é apontada como um possível reservatório e disseminador de bactérias resistentes. No entanto, o impacto das espécies selvagens neste fenómeno ainda não é totalmente compreendido, destacando a necessidade de investigação. Neste contexto, este estudo investigou a presença de Escherichia coli e Salmonella spp. em amostras fecais de cegonha-branca (Ciconia ciconia), garça-boieira (Bubulcus ibis) e ouriço-cacheiro (Erinaceus europaeus), provenientes de um centro de recuperação de animais selvagens em Portugal, caracterizando os perfis de resistência a 12 antibióticos e de capacidade de produção de 6 fatores de virulência dos isolados bacterianos através de metodologias de análise fenotípica convencionais. Foi possível obter 79 isolados de E. coli a partir de 39 das 43 amostras recolhidas, enquanto Salmonella spp. não foi detetada em nenhuma das amostras analisadas. Para o estudo dos perfis de resistência e virulência, foram selecionados até 2 isolados por amostra, num total de 75 isolados. Cerca de 64% (n=48) dos isolados apresentaram resistência a pelo menos um antibiótico e 8% (n=4) dos isolados não suscetíveis foram classificados como multirresistentes (MDR). As resistências mais frequentes foram à ampicilina (36%, n=27), tetraciclina (12%, n=9) e cloranfenicol (8%, n=6), enquanto todos os isolados se mostraram suscetíveis ao meropenem, aztreonam e às cefalosporinas de terceira geração. A maioria dos isolados não expressou fatores de virulência (81%, n=61), sendo que apenas 11% (n=8) produziram proteases, 7% (n=5) formaram biofilme e 4% (n=3) apresentaram atividade beta hemolítica. Assim, o estudo revela bactérias resistentes na fauna selvagem do sul de Portugal, sugerindo que estes animais podem ser reservatórios de estirpes resistentes. Destaca-se a importância da monitorização da RAM e da abordagem “Uma Só Saúde” para mitigar riscos, bem como a necessidade de compreender a resistência na vida selvagem para orientar iniciativas de conservação e promover o uso responsável de antibióticos
- Pesquisa de parasitas gastrointestinais, ectoparasitas e fungos com potencial patogénico em coelhosPublication . Vale, Carolina Silvano Valadão do; Carvalho, Luís Manuel Madeira de; Reisinho, Ana Teresa Severino Caldeira; Lozano, João Miguel Pestana (tutor)Os coelhos são cada vez mais requisitados como animais de companhia e, por conseguinte, mais frequentes nos centros de atendimento Médico Veterinário. O alojamento dos coelhos em espaços limitados durante um longo período e o maneio sanitário irregular, promovem uma maior exposição a diversos agentes com potencial patogénico, como ectoparasitas, endoparasitas e fungos, o que aliado ao carácter zoonótico de certos agentes, alerta para a necessidade da implementação de boas práticas de controlo destes agentes, numa abordagem de Uma Só Saúde. No período de setembro de 2023 a maio de 2024 foram colhidas amostras fecais, de descamação cutânea e de pelo a um total de 72 coelhos presentes à consulta no HEV- FMV ULisboa ou de origem externa. As amostras fecais recolhidas foram submetidas a técnicas qualitativas e quantitativas de coprologia para identificação de parasitas gastrointestinais. Nas amostras de descamação cutânea realizou-se a pesquisa de ectoparasitas e nas amostras de pelo investigou-se a presença de fungos, posteriormente testados para a expressão fenotípica (DNase, proteinase, biofilme, lecitinase e gelatinase). Registou-se a presença de parasitas gastrointestinais em 58% dos coelhos testados, de ectoparasitas em 10% dos coelhos e de fungos ambientais em 7% dos animais. Neste estudo, salientou-se a necessidade de providenciar melhores condições de higienização, aumentar a interação com o animal de companhia e proceder à desparasitação regular, como condicionantes essenciais para minimizar a incidência de parasitas gastrointestinais. As coccídias foram os parasitas gastrointestinais mais prevalentes, com o maior registo em coelhos jovens. Através da técnica de Mini-FLOTAC foram identificadas as espécies Eimeria exigua, Eimeria magna, E. perforans e Eimeria piriformis com patogenicidade moderada a baixa. Obteve-se uma média de 32 990 oOPG de Eimeria spp. com apenas 12% de coelhos parasitados doentes. Efetivamente, foi possível isolar somente fungos ambientais, nomeadamente Penicillium spp. Rhizopus spp. e Scopulariopsis spp., nos quais o maior índice de virulência foi registado para Scopulariopsis spp. com 60%. Este estudo permitiu evidenciar a diversidade de agentes zoonóticos ou com potencial patogénico para os coelhos e para o agregado familiar que os aloja. Salienta-se a importância das técnicas Mini-FLOTAC, imunofluorescência e a testagem dos fatores de virulência dos fungos ambientais, como exames complementares de diagnóstico a investir futuramente
- Desenvolvimento e validação no cão de um score clínico para a distinção de parvoviroses e gastroenterites não infeciosasPublication . Rodrigues, Diana Leonor Morais; Almeida, Virgílio da SilvaA triagem rápida e eficaz de doenças infeciosas em cães com gastroenterite inespecífica é essencial para prevenir a disseminação de agentes infeciosos e fornecer um tratamento imediato. Contudo, a ausência de ferramentas objetivas e o tempo até obtenção de um diagnóstico definitivo dificultam e retardam a confirmação dos casos infeciosos, comprometendo a adoção de medidas adequadas de isolamento e tratamento. Neste contexto, este estudo teve como objetivo desenvolver e validar um score clínico que pudesse ser utilizado na consulta inicial para auxiliar os médicos veterinários na diferenciação de parvoviroses e gastroenterites não infeciosas. Além disso, avaliou-se a viabilidade do uso do pacote AutoScore no programa R para a criação de A clínicos em medicina veterinária. Foi realizado um estudo observacional retrospetivo numa amostra de 157 cães, divididos em dois grupos: grupo experimental (n=111), composto por animais com diagnóstico positivo para parvovírus, e grupo controlo (n=46), com cães nos quais se conseguiu provar uma causa não infeciosa. Foram recolhidos dados clínicos e laboratoriais do sistema informativo do hospital escolar, tendo estes sido compilados em uma base de dados processada no AutoScore, gerando quatro modelos preditivos com diferentes combinações de variáveis e calibrações. Os modelos foram avaliados utilizando métricas como a área sob a curva, sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e valor preditivo negativo. O modelo final selecionado demonstrou bom desempenho, destacando-se pela combinação de simplicidade e relevância clínica. Com um valor limite de 44, este modelo apresentou sensibilidade de 88,2%, especificidade de 60,0%, valor preditivo positivo de 83,3% e valor preditivo negativo de 69,2%. Esses resultados refletem o equilíbrio necessário para priorizar a identificação de casos infeciosos, minimizando falso-negativos. Concluindo, foi criado um score clínico objetivo e prático, baseado em dados clínicos e laboratoriais de rápida obtenção, para auxiliar na triagem de cães com gastroenterite. A metodologia aplicada revelou-se eficaz e adaptável, tendo o AutoScore comprovado ser uma ferramenta eficiente na construção de scores clínicos. Apesar de algumas limitações, como o tamanho da amostra e a ausência de testagem completa para todos os agentes infeciosos, este trabalho representa um avanço na triagem e na gestão de gastroenterites caninas, oferecendo uma base sólida para estudos futuros
- Parasitas gastrointestinais e respiratórios em gatos na Ilha da Madeira, PortugalPublication . Neves, Catarina Gonçalves; Pinto, Cláudia Patrícia Paixão; Carvalho, Luís Manuel Madeira deOs registos parasitológicos em felídeos são escassos em Portugal e praticamente inexistentes na Ilha da Madeira. Perante esta lacuna, foi realizado um estudo epidemiológico com o objetivo de investigar a prevalência de parasitas gastrointestinais e pulmonares em gatos alojados em gatis no concelho do Funchal, de forma a avaliar o grau de parasitismo e o seu potencial impacto na saúde pública. Entre dezembro de 2022 e fevereiro de 2023, foram recolhidas e analisadas 112 amostras fecais, utilizando as técnicas de flutuação de Willis, sedimentação natural, coloração de Ziehl-Neelsen modificada e técnica de Baermann. No total, 35,71% das amostras revelaram-se positivas para pelo menos um parasita, indicando um elevado nível de parasitismo. Foram identificadas nove espécies ou géneros parasitários: Aelurostrongylus abstrusus (16,96%), Cystoisospora felis (8,93%), Toxocara cati (8,04%), Ancylostoma spp. (7,14%), Taenia spp. (2,68%), Dipylidium caninum (1,80%), Cryptosporidium sp. (1,64%, num subconjunto de 61 amostras), Cystoisospora rivolta (0,89%) e Toxascaris leonina (0,89%). Giardia spp. e Troglostrongylus brevior não foram detetados, ainda que tenham sido pesquisados. Cinco das nove espécies identificadas apresentam potencial zoonótico significativo. Estes resultados evidenciam uma elevada prevalência de parasitismo na população felina da região e sublinham as implicações em saúde pública associadas a portadores com ausência de sinais clínicos. O estudo reforça a necessidade de uma maior sensibilização da população e dos profissionais de saúde, bem como da implementação de medidas preventivas e de controlo eficazes para mitigar o risco zoonótico
- Biossegurança em explorações leiteiras na Ilha de São Miguel : o caso da diarreia viral bovina (BVD)Publication . Sousa, Margarida Pereira; Sousa, Rui Filipe Martins; Boinas, Fernando Jorge SilvanoO presente estudo teve como objetivo avaliar as práticas de biossegurança implementadas nas explorações de bovinos leiteiros da Ilha de São Miguel, nos Açores, com o propósito de prevenir a disseminação da Diarreia Viral Bovina. O estudo focou-se na identificação dos principais pontos críticos nas medidas de biossegurança adotadas e na proposta de melhorias que possam contribuir para otimizar a sua eficácia. Foi realizado um estudo observacional transversal, que incluiu questionários epidemiológicos a uma amostra de conveniência composta por quarenta explorações de bovinos leiteiros localizadas nos seis concelhos da Ilha de São Miguel. Todas as explorações inquiridas estão integradas no Programa Regional de Controlo e Erradicação da Diarreia Viral Bovina, o qual é de adesão obrigatória para todas as explorações de bovinos na Região Autónoma dos Açores. Foram efetuadas entrevistas pessoais (82,5%) e telefónicas (17,5%) aos produtores dessas explorações, abrangendo temas como a deteção e remoção de animais persistentemente infetados, a adoção da vacinação, os fatores de risco associados à exposição ao vírus, e as estratégias de disseminação de informações sobre a doença. Os resultados indicaram que, embora uma elevada percentagem de explorações tenha sido oficialmente declarada como livre de Diarreia Viral Bovina (80%), existem lacunas nas práticas de biossegurança. A implementação sistemática de quarentenas é insuficiente (12,5%), e a vacinação contra a Diarreia Viral Bovina é pouco frequente (20%). A transumância, uma prática comum na Região, foi identificada como um possível fator de risco para a transmissão do vírus (57,5%). Observou-se, ainda, uma relação positiva entre o nível de conhecimento dos produtores sobre a doença (75%) e a perceção dos mesmos sobre a adoção de medidas preventivas consideradas eficazes (100%). Recomenda-se a implementação de medidas para melhorar o controlo e erradicação da Diarreia Viral Bovina, incluindo a realização de visitas regulares pelos Serviços Oficiais às explorações com o estatuto infetado para monitorizar o cumprimento das medidas de biossegurança, a introdução de apoios financeiros para incentivar a adesão à vacinação, a implementação de normas obrigatórias para a quarentena de novos animais e a garantia da testagem antes da sua introdução no efetivo, a criação de um sistema de notificação para partilha de informação sanitária entre explorações vizinhas e a adoção de diretrizes para minimizar os riscos de disseminação do vírus durante o transporte de animais, como a definição de trajetos de risco
- Characterization of Crimean-Congo haemorrhagic fever maintenance in complex multi-host communitiesPublication . Xavier, Patrícia Alexandra Simões; Schmidt, Rámon Christian Gortázar; Almeida, Virgílio da SilvaCrimean-Congo Haemorrhagic Fever (CCHF) is the most globally distributed tick-borne viral disease. Hyalomma spp. ticks are the primary vectors and reservoirs of the CCHF virus. These ticks feed on diverse animal species, establishing complex host communities. However, not all species contribute equally to the viral transmission cycle. While some hosts amplify virus circulation, others exert a dilution effect. This study aimed to investigate how the characteristics of multi-host communities influence CCHF virus transmission dynamics. A total of 18 integrated wildlife monitoring points were selected in the Iberian Peninsula, combining health surveillance with animal population monitoring. 1461 blood samples were collected from wild boar (Sus scrofa) and red deer (Cervus elaphus) and analysed using enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) to detect antibodies against CCHF virus. Simultaneously, a grid of camera traps was employed to estimate species-specific relative abundance indices, quantify ecological interactions, and estimate biodiversity indices for each site. Key disease modulators, ecological and environmental variables were incorporated into a generalized linear mixed model (GLMM). Statistical analysis revealed that host communities predominantly composed by red deer, characterized by frequent red deer–wild boar interactions and low biodiversity, showed high seroprevalence rates. This finding suggests that homogeneous host communities, with a low presence of dilution hosts, facilitate increased interactions between infected ticks and amplifier hosts, such as wild ungulates. Consequently, these dynamics support the persistence of the virus in the ecosystem. A negative correlation was identified between the abundance of sheep and goats and virus exposure, signalling the potential role of small ruminants in mitigating virus transmission at the livestock–wildlife interface. A positive correlation was found between seropositivity and interactions involving red deer and lagomorphs, two key hosts of the tick vector. The best-fitting model included five significant predictors: relative abundance of red deer and small ruminants, interactions between wild and domestic hosts, precipitation seasonality, and the proportion of forest cover. The last two variables are critical for vector survival and activity and host distribution, underscoring the influence of bioclimatic factors on the disease's epidemiology
- Utilização de métodos coproparasitológicos para identificação de parasitas respiratórios e gastrointestinais em cetáceos arrojados nas regiões Centro e Norte da Costa PortuguesaPublication . Lobão, André Cabral Monjardino de Almeida; Flanagan, Carla Anne; Carvalho, Luís Manuel Madeira deO parasitismo é uma das formas de interação biológica mais bem-sucedidas na natureza, envolvendo cerca de metade das espécies existentes, e desempenha um papel essencial na saúde dos hospedeiros, populações e equilíbrio dos ecossistemas. O conhecimento sobre parasitas em cetáceos é limitado e este estudo visa ampliá-lo, analisando a diversidade, carga e prevalência de parasitas gastrointestinais e pulmonares em seis espécies arrojadas na costa centro e norte de Portugal. Foram analisadas amostras fecais de 75 cetáceos arrojados de 6 espécies diferentes, incluindo Delphinus delphis, Phocoena phocoena, Stenella coeruleoalba, Tursiops truncatus, Balaenoptera acutorostrata e Globicephala melas. Foram utilizados métodos coprológicos quantitativos (Mini-FLOTAC) e qualitativos (flutuação, sedimentação, coloração de Ziehl-Neelsen Modificada e um kit de imunofluorescência direta MERIFLUOR® Cryptosporidium/Giardia, além da pesquisa de parasitas macroscópicos por sedimentação espontânea. Foram identificados 11 taxa diferentes de helmintos, entre eles indivíduos pertencentes à Filo Nematoda e Classes Cestoda e Trematoda. Dos animais arrojados, 61,33% (46/75) foram positivos para, pelo menos, um táxon parasitário, 22,67 % (17/75) apresentaram coinfecção por, pelo menos, dois taxa. Das três técnicas utilizadas, o Mini-FLOTAC foi mais eficaz na deteção de ovos de nematodos e a Sedimentação na deteção de ovos de trematodos. Os parasitas mais prevalentes pertencem ao Filo Nematoda, sendo a família Anisakidae e a Ordem Ascaridida as que mostraram prevalência mais elevada, de 36,0% (27/75) cada, e as larvas de Pseudaliidae, de 5,3% (4/75). A Classe Trematoda foi representada por Odhneriella spp. 5,3% (4/75), Nasitrema spp. 2,7% (2/75), Zalophotrema spp. 2,7% (2/75), e Synthesium spp. 1,3% (1/75) e ovos indeterminados 8,0% (6/75). Todas as amostras testaram negativo para Cryptosporidium sp. (ZNM e IFD) e Giardia sp. (IFD). De todos os taxa identificados, os ovos de anisaquídeos foram os que obtiveram a maior carga média estimada (4865 OPG) e Nasitrema spp. a menor carga média estimada (40 OPG). Foram isoladas 28 larvas de anisaquídeos, 1 cestode indeterminado e mais de 50 trematodos (Ogmogaster antarctica) pelo método de sedimentação espontânea. Este estudo descreve, pela primeira vez, a morfologia e a morfometria de Ogmogaster antarctica parasitando Balaenoptera acutorostrata no Atlântico Norte. Estes dados são especialmente relevantes para a implementação de planos de conservação dos cetáceos na costa portuguesa, contribuindo para a preservação das espécies e o equilíbrio dos ecossistemas marinhos
- Estudo parasitário de lobos, cães e raposas na margem sul do Douro, Portugal continentalPublication . Oliveira, Francisco Santos Gomes Simas; Santos, Nuno Gonçalo Carvalho Caroço dos; Carvalho, Luís Manuel Madeira deA interação entre canídeos selvagens e domésticos, como lobo-ibérico (Canis lupus signatus), raposa-vermelha (Vulpes vulpes silacea) e cão doméstico (Canis lupus familiaris), em ambientes compartilhados facilita a transmissão de parasitas gastrointestinais, tornando essencial o estudo desses parasitas nestas populações. Esta dissertação pretende preencher a lacuna de pesquisas parasitológicas na região ao sul do Douro, concentrando-se nos parasitas gastrointestinais que afetam as três espécies de canídeos nessa área. Foram colhidas 85 amostras de fezes de canídeos da margem sul do Douro entre setembro e dezembro de 2022, e analisadas no Laboratório de Parasitologia e Doenças Parasitárias da FMV usando técnicas coprológicas, incluindo flutuação, sedimentação e 3 repetições de McMaster por amostra. Os dados, que incluíram identificação, espécie, coordenadas geográficas e resultados coprológicos, foram inicialmente inseridos no software Epicollect5, transferidos para Microsoft Excel 2016 e exportados para IBM SPSS 29.0.2.0. As análises estatísticas, realizadas com um nível de significância de p<0,05, incluíram estatística descritiva, ANOVA, testes de Qui-quadrado, testes de Fisher e esfericidade de Mauchly. Das 85 amostras recolhidas, sendo 60 de raposa (70,6%), 16 de cão (18,8%) e 9 de lobo (10,6%), 60% (51/85) estavam parasitadas. Obtivemos uma prevalência de 76% (47/51) de Ancylostoma sp., 18% (11/51) de Toxascaris leonina e 6% (4/51) de Toxocara canis. A maioria das amostras parasitadas (78,4%, 40/51) apresentaram infeções simples, enquanto 21,6% (11/51) exibiram infeções mistas. A combinação mais comum nas infeções mistas foi entre Toxocara canis e Ancylostoma sp. (64%, 7/11) seguida pela combinação de Toxascaris leonina e Ancylostoma sp. (36%, 4/11). Não foram observadas coinfecções entre Toxascaris leonina e Toxocara canis. O teste de McNemar revelou uma diferença significativa na deteção de Ancylostoma sp. entre os métodos de flutuação e sedimentação (p<0,001). No entanto, ambos os métodos mostraram desempenho comparável na identificação de Toxascaris leonina e Toxocara canis, sem diferenças significativas (p=0,250 e p=0,500, respetivamente). Este trabalho é importante para aprofundar o conhecimento sobre a interação entre parasitas de canídeos domésticos e silvestres na margem sul do Douro, destacando a necessidade de monitorização contínua e estratégias de desparasitação eficazes para proteger tanto a fauna silvestre, quanto a saúde pública na região