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- Valorization of by-products from barbecue production through fermentation processesPublication . Braga, Joana Silva; Prista, Catarina Geoffroy; Costa, Ana Catarina SousaIndustrial food processing in Portugal generates substantial by-products, resulting in environmental challenges and economic losses for companies. Currently, consumer trends favor sustainable, natural, and nutritious food products. Waste streams are a common issue in the food industry, specifically in sauce production, where products fit for consumption with high amounts of valuable nutrients and free sugars are wasted. This study addresses the bio-valorization of sugar-rich barbecue sauce waste streams through fermentation, aiming to create value-added ingredients for sauce production, promoting circular economy practices. The research investigated the fermentation of barbecue streams at 25% and 50% incorporation levels using various microbial consortia, including lactic acid bacteria and yeasts. Lab-scale fermentations were monitored by measuring pH, total soluble solids, titrable acidity, sugar consumption, and metabolite production. A selected consortium comprising yeast (Saccharomyces boulardii) and three lactic acid bacteria (Lactiplantibacillus plantarum, Lacticaseibacillus rhamnosus, and Weissella confusa) demonstrated optimal performance, evidenced by decreasing pH and TSS to 3.04 and 5.42ºBrix, respectively, and increasing acidity to 0.697 g lactic acid/100g from lactic acid production, throughout 12-day fermentation period at 25% incorporation of stream. Fermented samples were characterized for chemical composition (humidity, water activity, antioxidant capacity, colour, protein, and mineral content) and physical properties (apparent viscosity and particle size distribution). Antioxidant activity, protein content, humidity, water activity, and mineral content did not change significantly (p>0.05), though some increases were verified. Viscosity and particle size distribution showed significant changes (p<0.05) with increases to 32.024 Pa.s and in the quantity of smaller particles (101.46μm), respectively, at 25% incorporation of the stream. Antimicrobial assays revealed that fermented samples showed total or partial inhibition of several food spoilage lactic acid bacteria and yeasts. This work demonstrates the potential of fermentation in upcycling barbecue waste streams, contributing to a more sustainable food production and circular economy in the sauce manufacturing industry.
- As imagens das margens urbanas na Literatura Brasileira dos séculos XX e XXIPublication . Liao, Ruiyuan; Martínez Teixeiro, AlvaAtualmente, a margem urbana faz parte da cidade e os seus habitantes tornaram-se uma parte importante da população urbana. Quando rompem as barreiras e entram na cena literária, a imagem desse espaço deixa de ser escrita por outros e começa a mudar. Neste trabalho, analisamos as imagens das margens urbanas na Literatura Brasileira desde o início do século XX até ao início do século XXI. Escolhemos cinco obras de autores relevantes e de diferentes períodos, que apresentam nas suas obras diversas imagens literárias das margens urbanas e da cultura única desse espaço. As obras analisadas são: Capitães da areia (1937), de Jorge Amado; Quarto de despejo (1960), de Carolina de Jesus; Cidade de Deus (2018), de Paulo Lins; Becos da Memória (2017), de Conceição Evaristo; O Sol na Cabeça (2018), de Geovani Martins. Através do estudo dessas obras, procurámos construir e analisar criticamente uma imagem literária completa e diversa das margens urbanas.
- Long-term stability of residual hearing and hearing performance in complex acoustic environments in cochlear implant users with electric-acoustic stimulationPublication . Bandeira, Mariana Aguiar; Weißgerber, Tobias; Luís, LeonelOs implantes cocleares são reconhecidos como os dispositivos neuroprotéticos mais avançados atualmente e tornaram-se o tratamento padrão para indivíduos com perda auditiva neurossensorial severa a profunda que não se beneficiam suficientemente dos aparelhos auditivos de amplificação sonora. Um implante coclear funciona convertendo sons em sinais elétricos que estimulam diretamente o nervo auditivo, contornando as partes danificadas do ouvido interno. Embora os implantes cocleares ofereçam uma representação acústica menos detalhada em comparação com a audição natural, especialmente no que diz respeito às pistas espectro-temporais, eles melhoram significativamente a perceção da fala na maioria dos pacientes. Indivíduos com perda auditiva severa a profunda em altas frequências e audição residual significativa em baixas frequências (ou seja, perda auditiva descendente) inicialmente não eram candidatos a implantes cocleares convencionais. Isso se devia ao risco de danos à cóclea durante a cirurgia, comprometendo a audição residual. No entanto, esses pacientes frequentemente enfrentam dificuldades na adaptação às próteses auditivas tradicionais. Em 1999, o conceito de estimulação eletroacústica combinada (EAS) foi proposto por um grupo da Universidade de Frankfurt (von Ilberg et al., 1999). Esses sistemas integram a estimulação elétrica das porções basais do gânglio espiral com a estimulação acústica simultânea das frequências mais baixas, localizadas na região apical, fornecida por um aparelho auditivo. Isso significa que a capacidade de ouvir sons de baixa frequência pode ser aprimorada através da amplificação acústica integrada ao implante coclear. O uso da EAS requer a preservação da audição residual após a cirurgia e, para garantir benefícios a longo prazo, é fundamental que a audição residual permaneça estável a longo termo. Sabe-se que a audição residual em baixas frequências pode deteriorar-se ao longo do tempo, pelo que a avaliação contínua da sua estabilidade a longo prazo é essencial. Além disso, embora os pacientes que utilizam EAS tenham bom desempenho nos testes de perceção de fala realizados no silêncio e na presença de ruído competitivo, eles relatam maior esforço auditivo e dificuldades na perceção da fala em ambientes acústicos complexos. Os testes clínicos de fala são tipicamente realizados em ambientes controlados, como em cabines acusticamente tratadas, e não reproduzem cenários de audição da vida real, que muitas vezes envolvem ruído de fundo e reverberação. Como resultado, os testes clínicos atualmente usados podem não capturar totalmente o desempenho auditivo do indivíduo em situações cotidianas.Esta tese está dividida em duas partes. A primeira parte é uma análise retrospetiva da preservação auditiva a longo prazo após cirurgia de implante coclear em pacientes candidatos a EAS do Hospital Universitário de Frankfurt, Alemanha. A segunda parte é uma investigação prospetiva da perceção da fala, esforço auditivo e localização sonora em usuários de EAS. Objetivos 1) Avaliar a estabilidade a longo prazo da audição residual após cirurgia de implante coclear com preservação auditiva e avaliar o uso a longo prazo da EAS. 2) Avaliar a perceção de fala e o esforço auditivo de pacientes com EAS em ambientes auditivos complexos. Analisar a localização auditiva de usuários de EAS. Métodos 1) A preservação auditiva a longo prazo de 87 indivíduos com EAS (110 orelhas) foi avaliada através de uma análise retrospetiva de prontuários. Os resultados foram avaliados através da análise dos limiares de condução aérea obtidos durante o acompanhamento clínico no Hospital Universitário de Frankfurt, Alemanha, em vários momentos, incluindo pré-operatório, 3, 6 e 12 meses de pós-operatório, e a medida mais recente (a longo prazo) disponível. Neste estudo foi utilizada a definição de preservação auditiva do grupo HEARRING (Skarzynski et al., 2013), complementada pela análise da média tonal nas frequências baixas. 2) Este estudo avaliou a perceção de fala e o esforço auditivo subjetivo de seis usuários de EAS em uma situação simulada de escuta em uma sala de aula com acústica desfavorável. O ambiente era caracterizado pela coexistência de reverberação e ruído modulado, com uma separação angular de 60° entre a fonte de fala e o ruído. Os limiares de receção de fala (SRT) em condições de ruído modulado e contínuo foram avaliados utilizando o Oldenburg Sentence Test (OLSA). Para análises do esforço auditivo subjetivo, foi utilizado o método ACALES (Adaptive Categorical Listening Effort Scaling procedure) (Krueger et al., 2017). Alem disso, avaliou-se o desempenho dos participantes na localização sonora utilizando diferentes tipos de estímulos: passa-baixo, passa-alto e banda larga. Resultados 1) O período médio de observação a longo prazo foi de 70,4 meses. Durante os primeiros três meses de seguimento, todos os participantes apresentaram preservação auditiva, sendo 54% com preservação total e 46% com preservação parcial, de acordo com a escala de preservação auditiva HEARRING. No acompanhamento a longo prazo, 21,3% mantiveram preservação auditiva completa, 70,5% apresentaram preservação parcial e 8,2% preservação mínima. Nenhum dos participantes desenvolveu perda auditiva completa ao longo do estudo. Além disso, 81,6% continuam utilizando o EAS a longo prazo. 80,5% dos participantes mantiveram audição residual funcionalmente relevante, entre os quais 88,6% permanecem usuários do EAS a longo prazo. 2) Os participantes apresentaram limiares de receção de fala (SRTs) significativamente melhores em condições de ruído modulado em comparação com ruído contínuo. De modo geral, também obtiveram SRTs melhores quando a fala era separada do ruído, embora essa diferença não tenha atingido significância estatística, mas foi considerada clinicamente relevante. Os SRTs em condições de reverberação e ruído modulado apresentaram uma deterioração significativa em comparação com a condição de campo livre. O esforço auditivo em ambiente reverberante foi significativamente maior do que em campo livre. Nos testes de localização sonora, não foi identificado qualquer impacto significativo das características espectrais dos estímulos (passa-baixo, passa-alto ou banda larga) no desempenho dos participantes. Conclusão: 1) A audição residual após o implante coclear com preservação auditiva mostra-se, na maioria dos pacientes, suficientemente estável para possibilitar o uso prolongado da EAS. No entanto, uma limitação da classificação HEARRING é sua incapacidade de prever diretamente o uso da EAS pelos pacientes, pois avalia apenas a alteração relativa da audição, sem levar em conta a quantidade absoluta de audição residual funcional. 2) O acesso a pistas acústicas de baixa frequência, incluindo a frequência fundamental e a Diferença de Tempo Interaural (ITD), pode ser uma das razões pelas quais os usuários de EAS apresentam melhor perceção de fala em ambientes com ruído modulado em comparação com ruído contínuo. No entanto, a reverberação em presença de ruído modulado ainda exerce um impacto significativo na perceção de fala desses indivíduos. Embora os usuários de EAS sejam sensíveis à ITD nas frequências mais baixas, a hipótese de que sinais passa-baixo proporcionariam uma melhor localização sonora em relação aos sinais passa-alto não pôde ser confirmada no presente estudo. O impacto positivo da estimulação acústica na perceção da fala em ruído modulado, assim como o efeito da separação das fontes sonoras e da audição residual no esforço auditivo, não pôde ser confirmado neste estudo. Isso provavelmente se deve ao número limitado de participantes, que pode não ter sido suficiente para revelar resultados estatisticamente significativos. Outros pacientes usuários de EAS serão convidados a participar da pesquisa em andamento. Levando em conta que os usuários de EAS continuam a enfrentar dificuldades na compreensão da fala em ambientes acústicos complexos, é crucial que os testes clínicos de fala repliquem cenários de audição do cotidiano. Além disso, a mensuração do esforço auditivo — uma das principais queixas dos indivíduos com perda auditiva — deve ser integrada à rotina clínica. Dado o grande volume de evidências clínicas que demonstram o benefício adicional da EAS em comparação com a estimulação elétrica isolada ou a estimulação acústica isolada, a EAS deve se tornar a opção de tratamento padrão para indivíduos com perda auditiva descendente que não obtêm benefícios suficientes com a amplificação convencional.
- Geografia e Diversidade Cultural. Uma experiência didática no 8º ano de escolaridadePublication . António, Joana Filipa Silva; Esteves, Maria Helena Mariano de Brito FidalgoO presente relatório foi elaborado no âmbito da Iniciação à Prática Profissional, do Mestrado em Ensino de Geografia no 3.ºCiclo do Ensino Básico e Secundário, e apresenta os resultados da prática de ensino supervisionada, que decorreu numa turma do 8.º ano, do Externato Cooperativo da Benedita. A prática letiva teve incidência no tema da população e Povoamento e no subtema da Diversidade cultural. O estudo da Diversidade Cultural teve como documentos orientadores a Estratégia Nacional de Educação para a Cidadania, sobretudo os temas dos Direitos Humanos (civis e políticos, económicos, sociais e culturais e de solidariedade), da Igualdade de Género e da Interculturalidade (diversidade cultural e religiosa), e o Perfil dos alunos à Saída da Escolaridade Obrigatória. As estratégias de ensino e aprendizagem foram diversificadas e adaptadas às características da turma, de forma a estimular o desenvolvimento de competências. Desta forma, foram usadas estratégias de Aprendizagem Cooperativa, com o objetivo de orientar os alunos para uma participação ativa na construção do seu conhecimento. Outra estratégia usada foi a Aprendizagem por Descoberta Guiada, que permitiu envolver os alunos na gestão das suas próprias aprendizagens. Ao longo da prática letiva foram, também, realizadas atividades promotoras da integração de alunos estrangeiros na sala de aula. Estas estratégias tiveram o intuito de fazer chegar os conteúdos do programa de Geografia, à diversidade da sala da aula. Os resultados da prática evidenciam o potencial da diversidade cultural, em Geografia, na formação cidadã dos alunos, permitindo o desenvolvimento de competências de natureza cognitiva, pessoal, social e emocional. Foi importante conhecer o contexto escolar dos alunos de forma a ultrapassar as dificuldades e despertar neles o interesse sobre a importância da integração da diferença e do respeito pelos Direitos Humanos.
- Causas de morte de pinguim-de-Magalhães (Spheniscus magellanicus) arrojados nas praias de Florianópolis, BrasilPublication . Charraz, Ana Margarida Lopes; Almeida, Virgílio da Silva; Kolesnikovas, Cristiane (Tutora)Os pinguins são aves marinhas não voadoras que pertencem à família Spheniscidae que contempla um total de 18 espécies distribuídas pelo hemisfério sul. De entre essas espécies, o pinguim-de-Magalhães (Spheniscus magellanicus) reproduz-se nas costas temperadas da Argentina, Chile e Ilhas Malvinas e durante a sua migração de inverno surge com muita frequência no litoral brasileiro. O objetivo deste estudo foi identificar as principais causas de morte do pinguim de Magalhães no sul do Brasil. Assim, entre janeiro e dezembro de 2023 foram sujeitos a necrópsia 98 pinguins, nas instalações da Associação R3 Animal, em Florianópolis, Santa Catarina. A necrópsia e os exames complementares permitiram identificar a causa de morte. A maioria de pinguins era muito jovem (95,9%, 94/98), no seu primeiro ano de vida, e 76,5% (75/98) eram fêmeas. O mês onde foram registadas mais mortes foi Agosto (35,7%, 35/98) e uma grande proporção dos pinguins (86,7%, 85/98) encontrava-se em estados de caquexia. Todos os pinguins tiveram diagnósticos definitivos de causa de morte. As doenças não infeciosas foram a causa de morte mais frequente (77,6%, 76/98) seguidas das doenças infeciosas (22,5%, 22/98). Entre as causas de mortalidade não infeciosa, o diagnóstico mais frequente foi de síndrome metabólica (84,2%, 64/76), seguida do afogamento (14,5%, 11/76) e da asfixia por agente físico (1,3%, 1/76). Nas causas infeciosas destaca-se a infeção bacteriana respiratória (45.5%, 10/22), seguida do parasitismo respiratório por Cyathostoma phenisci (27,3%, 6/22), da Aspergilose (18,2%, 4/22) e do choque séptico (9,1%, 2/22). Grande parte dos pinguins teve interações antropogénicas (74,5%. 73/98). Muitos pinguins (73,5%, 72/98) estavam parasitados no estômago e/ou nos intestinos, e em 24,5% (24/98) o parasitismo contribuiu para o desfecho fatal. Os resultados obtidos são importantes para caraterizar as causas de mortalidade do pinguim-de-Magalhães na costa brasileira e para ajudar os responsáveis dos centros de reabilitação do litoral brasileiro a desenharem estratégias de conservação e de reabilitação desta ave marinha
- Efeito da incorporação de farinha de larvas de mosca soldado negra e Chlorella vulgaris na dieta de galinhas poedeiras sobre a produtividade e a qualidade e características sensoriais do ovoPublication . Dias, André Manuel Lourenço; Redford, Maria Madalena dos Santos LordeloCom o aumento da preocupação com a sustentabilidade ambiental, têm-se procurado matérias-primas alternativas, mais sustentáveis, para fabricar dietas para monogástricos. Os insetos e as algas têm demonstrado ter uma boa composição nutricional, e podem ser produzidos localmente, com uma pegada carbónica interessante. Este estudo teve como objetivo a avaliação dos efeitos da alimentação de galinhas poedeiras com uma dieta constituída por matérias-primas locais sobre os parâmetros produtivos e a qualidade e caraterísticas sensoriais do ovo. Formulou-se uma dieta controlo, com matérias-primas convencionais, e uma dieta teste, com matérias-primas locais, incluindo farinha de mosca soldado negra e Chlorella vulgaris. Durante cinco semanas, utilizaram-se quarenta e oito galinhas poedeiras da estirpe Brown Nick, alojadas individualmente. Os animais foram alimentados ad libitum, vinte e quatro com dieta controlo e os restantes com dieta teste. Os parâmetros produtivos analisados foram o peso vivo, peso do ovo, taxa de postura, massa de ovo, ingestão alimentar semanal e índice de conversão. Foi medida a altura da câmara de ar, o pH da clara e da gema e a cor da casca e da gema. Verificou-se a presença de defeitos e calculou-se a percentagem dos diferentes constituintes do ovo, o índice de forma, de casca e de gema, as unidades Haugh, a área superficial do ovo e a espessura da casca. Foi realizada análise sensorial com dois testes triangulares. Os resultados indicaram que a dieta teste resultou em menor taxa de postura (p-value = 0,0217) e massa de ovo (p-value = 0,0286). A cor da casca e da gema apresentaram-se mais acastanhada e mais alaranjada, respetivamente. Foram sentidas diferenças sensoriais entre os ovos dos dois grupos. Em suma, a alimentação das galinhas poedeiras com matérias-primas locais, incluindo farinha de inseto e microalga, apresentou efeitos negativos sobre alguns parâmetros produtivos, mas melhorou a coloração do ovo.
- As sentenças intermédias e o caso dos metadados : um estudo do Acórdão n.º 268/2022 do Tribunal Constitucional sob a perspetiva do artigo 282.º, n.º 4 da ConstituiçãoPublication . Alves, Catarina Fernandes; Morais, Carlos Blanco de, 1957-A presente dissertação aborda o tema das sentenças intermédias de restrição temporal de efeitos, previstas no artigo 282.º, n.º 4 da Constituição da República Portuguesa, atendendo ao caso concreto do Acórdão n.º 268/2022 do Tribunal Constitucional, que declarou a inconstitucionalidade com força obrigatória geral dos artigos 4.º, 6.º e 9.º da Lei n.º 32/2008, de 17 de julho. Na sequência da declaração de invalidade da Diretiva 2006/24/CE do Parlamento Europeu e do Conselho, de 15 de março de 2006, através da decisão «Digital Rights Ireland» do Tribunal de Justiça da União Europeia, o Tribunal Constitucional declarou a inconstitucionalidade dos referidos artigos da Lei n.º 32/2008, que transpôs a Diretiva em causa, com efeitos desde a sua entrada em vigor e ressalvando os casos julgados, conforme o disposto nos artigos 282.º, n.º 1 e 3 da Lei Fundamental portuguesa. Deste modo, ficou vedado o recurso a metadados para efeitos de investigação criminal. Com efeito, gerou-se um clima de incerteza e insegurança sobre os casos não transitados em julgado e nas investigações criminais que se encontravam em curso, pois a recolha de prova com base em metadados deixou de ter base legal. Importa saber se a rigidez dos efeitos da declaração de inconstitucionalidade com força obrigatória geral poderia ter sido atendida aquando da pronúncia do Tribunal Constitucional, através da restrição dos seus efeitos temporais, à luz do artigo 282.º, n.º 4 da Constituição. Deste modo, através do estudo doutrinário e dogmático das sentenças intermédias e de uma análise aprofundada da jurisprudência portuguesa e europeia, pretende-se demonstrar que a prolação de uma sentença de restrição temporal de efeitos no caso concreto, poderia ter salvaguardado casos pendentes, num cenário em que a manutenção da situação de inconstitucionalidade acaba por ser mais favorável do que o acatamento inflexível dos efeitos da declaração de inconstitucionalidade.
- A “sobrenaturização” do real em O Vendedor de Passados e Teoria Geral do Esquecimento, de José Eduardo AgualusaPublication . Guo, Xiurui; Mata, Inocência Luciano dos SantosO objetivo deste estudo é analisar as representações do supra-real – termo que mais adiante será problematizado – em duas obras do escritor angolano José Eduardo Agualusa. São elas os seguintes romances: O Vendedor de Passados (2004) e Teoria Geral do Esquecimento (2012). Pretende-se analisar a relação entre os fenómenos do supra-real e o contexto sociocultural nos dois romances referidos. O enfoque destas duas obras será analisado e comparado com as manifestações desses fenómenos com uma conotação fantástica, insólita e invulgar no contexto da história da guerra civil, no contexto social, das histórias mitológicas e das crenças religiosas. São apresentadas breves análises das duas obras separadamente, bem como a ligação entre os modos de ficção dos protagonistas de ambas, no contexto da guerra civil, no contexto da súbita intrusão do sonho na realidade, através de crenças e mitos culturais locais. No sonho real, a realidade é supra-real. Propõe-se, assim, analisar a representação do que a teoria designa por supra-real nestes dois romances contemporâneos como a manifestação e expressão de uma consciência crítica do real, do social e do político. Ver-se-ão também os diferentes conceitos do supra-real, tendo em conta os seus usos na crítica em África assim como nos países da América do Sul, enumerando as diferenças entre estas percepções e as dos povos locais. Analisar-se-á por que razão o supra-real pode considerar-se uma manifestação natural em certas sociedades, articulando-o com a memória dos traumas coletivos provocados por conflitos políticos, sociais e étnicos como são os casos dos romances acima referidos.
- Leveraging deep learning models for studying RNA splicing in health and diseasePublication . Barbosa, Pedro; Fonseca, Alcides; Fonseca, Maria CarmoDeep learning models have demonstrated remarkable potential across various domains, including biology. Despite this, scientists and clinicians face significant challenges when using these tools in practice. One major concern is that biological systems are inherently complex, raising doubts about whether even the most advanced models can fully capture their intricacies. Additionally, the “black box” nature of these million-parameter models poses a barrier to researchers seeking not only accurate predictions but also mechanistic understanding. This thesis investigates the practical applications of deep learning models within research contexts. It specifically focuses on models trained on genomic sequences to predict RNA splicing, the domain of application for this work. The research addresses two key challenges: variant effect prediction, which serves as a practical application to assess model performance, and model interpretability, which aims to advance scientific understanding of the underlying mechanisms of RNA splicing. We first addressed the problem of predicting the effects of variants that affect splicing in deep intronic regions, which are often ignored in genetic tests but now are recognized as important. Through a comprehensive evaluation of state-of-the-art computational models on curated datasets of disease-causing deep intronic variants, we revealed the strengths and limitations of these methods. In particular, we found that pure sequence-based deep learning models, like SpliceAI and Pangolin, were effective in variant prediction and that models combining SpliceAI predictions with additional features did not improve performance. Nevertheless, we showed that regardless of the model, there is still room for improvement, especially for variants disrupting splicing regulatory elements, which were often misclassified. For model interpretability, we conducted an in-depth analysis of SpliceAI to uncover its learned representations of RNA splicing mechanisms. We investigated SpliceAI’s ability to study alternative splicing via large-scale ablation experiments. Our findings showed that SpliceAI distinguishes between constitutive and alternatively spliced exons and uses RNA-binding protein motifs as features for its predictions. However, we also highlight some limitations and cautions for its use in such analyses. We further explored model interpretability by developing strategies to study deep learning models and splicing locally, at the individual exon level. We combined genetic programming algorithms with domain-aware grammars to produce semantically-rich synthetic datasets, demonstrating their suitability for local explainable AI in genomics. Additionally, we highlighted the expressive power of grammars in enabling the design of in silico experiments, using the deep learning model as an oracle. These concepts were integrated into a software, designed for splicing-related experiments, assuming the deep learning model accurately reflects the biological processes involved. In conclusion, this thesis demonstrated both the potential and current limitations of using deep learning models as research tools for studying RNA splicing. This work also contributed open-source software and placed a strong focus on reproducibility, ensuring that this research can be adopted and extended by the broader scientific community.
- Investigating the blood-brain barrier translocation ability of antiviral monobodiesPublication . Kort, Cyan Zoey; Veiga, Ana Salomé Rocha do Nascimento; Brito, Maria Alexandra de Oliveira Silva Braga Pedreira deO SARS-CoV-2, entre outros vírus, pode atingir o encéfalo, o que torna crucial que os tratamentos antivirais visem eficazmente as infeções encefálicas. Embora a taxa de mortalidade do SARS CoV-2 tenha diminuído, particularmente com o aparecimento da variante Omicron, a sua elevada transmissibilidade resultou em milhões de mortes em todo o mundo, sobrecarregando os sistemas de saúde. A comunidade científica mundial desenvolveu rapidamente várias vacinas, reduzindo significativamente a transmissão e a gravidade do vírus. Atualmente, quase 70% da população mundial recebeu pelo menos uma dose de uma vacina contra a COVID-19. No entanto, a elevada taxa de mutação do SARS-CoV-2 exige atualizações contínuas da vacina e doses de reforço. Assim, estratégias de tratamento continuam a ser cruciais a par da prevenção. Os anticorpos terapêuticos oferecem vantagens, incluindo elevada especificidade e afinidade, e métodos estabelecidos para a produção em grande escala. No entanto, a produção de anticorpos é frequentemente dispendiosa e morosa. Além disso, as patentes protegem grande parte da tecnologia relevante, limitando a acessibilidade generalizada. Assim, a procura de produção de anticorpos de baixo custo e em grande escala para doenças comuns constitui um desafio. Para resolver estas questões, os investigadores estão a explorar monocorpos derivados do domínio III da fibronectina humana. Esta estratégia tem-se revelado promissora, oferecendo vantagens em relação aos anticorpos tradicionais. Por exemplo, os monocorpos são mais pequenos, o que lhes permite atingir alvos intracelulares, embora isto também reduza a sua semi-vida. Além disso, os monocorpos não possuem a região cristalizável do fragmento dos anticorpos, o que reduz o risco de efeitos secundários imunológicos. A sua produção é menos dispendiosa e, como não possuem ligações dissulfureto, podem ser expressos funcionalmente no citoplasma bacteriano. Dado que a utilização de monocorpos para combater infecções virais está ainda numa fase inicial, o principal objetivo deste estudo é investigar a capacidade de um monocorpo antiviral atravessar a barreira hemato-encefálica (BHE). A BHE, uma estrutura crítica que regula o transporte entre a corrente sanguínea e o encéfalo, constitui um obstáculo significativo à administração de medicamentos. A BHE é composta principalmente por células endoteliais da microvasculatura encefálica, que diferem de outras células endoteliais por formarem complexos juncionais elaborados, não terem fenestrações e conterem um elevado número de mitocôndrias. O transporte através da BHE pode ocorrer por vários mecanismos, incluindo a difusão passiva, transporte ativo de efluxo através de transportadores da família ATP-binding cassette (ABC), transportadores de soluto, transcitose e migração de células mononucleares. Entre estes, a transcitose mediada por receptores (RMT) é frequentemente utilizada na administração de fármacos, mas a sua dependência de receptores específicos limita a sua capacidade. A transcitose mediada por adsorção (AMT), embora também saturável, oferece uma maior capacidade devido à adsorção não específica de moléculas. Os BHE “shuttles” (BHE-S) são moléculas que podem atravessar especificamente as células endoteliais e acumular-se no encéfalo. Ao longo deste trabalho, um monocorpo previamente desenvolvido, com capacidade neutralizante comprovada contra o SARS-CoV-2, foi testado na sua forma original, bem como conjugado a um BHE-S. A translocação da BHE foi avaliada utilizando um ensaio Transwell, sendo os monocorpos detetados e quantificados por western blot. As células HBEC-5i foram semeadas e cultivadas durante oito dias para formar junções. Foram utilizadas duas configurações experimentais: uma sem soro durante a incubação do monocorpo e outra com soro durante a incubação do monocorpo no meio de cultura celular. Ambos os monocorpos atravessaram a BHE in vitro, sem diferença significativa entre o monocorpo original e o monocorpo conjugado. Além disso, nenhum dos monocorpos afectou a integridade da BHE, tal como confirmado pelo teste de permeabilidade fluoresceína isotiocianato-dextrano 4 (FD4). Para garantir que os monocorpos não tinham qualquer efeito tóxico nas células utilizadas no ensaio de translocação, a viabilidade celular foi avaliada através de um ensaio de citotoxicidade. A citotoxicidade foi avaliada incubando as células com monocorpos durante 24 horas e medindo a sua capacidade de converter a resazurina (um corante redox) em resorufina. Não se registaram efeitos citotóxicos em concentrações até 2 µM, a concentração mais elevada testada. A estabilidade dos monocorpos foi avaliada através da análise da distribuição das partículas e da homogeneidade por dispersão dinâmica da luz. O índice de polidispersão mais elevado do monocorpo conjugado em tampão de fosfatos (PBS) indicava um aumento da polidispersão. No entanto, a estabilidade da conjugação monocorpo-shuttle foi também avaliada através da comparação da temperatura de fusão do monocorpo original e do seu conjugado em tampão Tris HCl e PBS, tendo-se verificado que diminuía ligeiramente após a conjugação, mas continuava a apresentar uma elevada termoestabilidade. O BHES não interferiu com a ligação do monocorpo ao seu alvo, conforme indicado pelos valores semelhantes de afinidade para ambos os monocorpos utilizando a ressonância plasmónica de superfície em fibra ótica sem fluidos (ffFO-SPR). Uma vez que nenhum monocorpo chegou ainda ao mercado, novas estratégias para melhorar a farmacocinética e a biodistribuição serão cruciais para transformar estas moléculas promissoras em terapêuticas eficazes.