Caracterização de Enterococcus spp. recolhidos em cantinas universitárias

Abstract

Enterococcus são bactérias Gram-positivas, frequentemente isoladas de uma diversidade de ambientes, incluindo o trato gastrointestinal de seres humanos e animais. Neste contexto, o presente estudo teve por objetivo avaliar a atividade hemolítica e o fenótipo de resistência a antibióticos de Enterococcus spp. isolados de amostras alimentares recolhidos em cantinas universitárias e de superfícies relacionadas. Durante um período de cinco meses, foram recolhidas 67 amostras de alimentos e 31 de superfícies. As amostras foram processadas em laboratório, as diluições foram inoculadas em meio de cultura Slanetz & Bartley e colocadas a incubar a 37 °C. A partir dessas amostras, foram isoladas 253 microrganismos, as quais, subsequentemente, foram cultivadas em meio diferencial Bílis Esculina Azida agar, permitindo a identificação presuntiva de 112 Enterococcus (66%) provenientes de alimentos e 58 (34%) de superfícies relacionadas. De seguida foi avaliada a diversidade genética dos isolados, com recurso à técnica de RAPD-PCR (Reação em Cadeia da Polimerase com Amplificação Aleatória de DNA Polimórfico), resultando na seleção de 93 (isolados) perfis distintos como representantes da coleção de Enterococcus spp. em estudo. Após a identificação molecular ao nível de espécie, os isolados foram classificados como Enterococcus faecalis (58%), Enterococcus faecium (14%) ou Enterococcus sp. (28%). Quanto à atividade hemolítica, os isolados foram cultivados em meio suplementado com 5% de sangue de Cavalo, observando-se que 4% (3/69) dos isolados de alimentos apresentaram atividade positiva. No entanto, tal atividade não foi detetada em nenhum (0/24) dos isolados de superfície. Relativamente à resistência a antibióticos, a mesma foi determinada pelo método de difusão em disco. Deste modo, os isolados demonstraram resistência à Quinupristina-Dalfopristina (54% de alimento; 50% de superfícies relacionada), Rifampicina (38%; 63%), Eritromicina (25%; 8%), entre outros antibióticos, de acordo o critério Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Utilizando os critérios definidos pelo European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST), observou-se resistência à Quinupristina-Dalfopristina (68%; 83%), Estreptomicina (32%; 33%), Teicoplanina (27%; 4%) e Levofloxacina (16%; 8%). Em síntese, os resultados indicaram a presença de Enterococcus spp. em alimentos e superfícies de cantinas universitárias, evidenciando a necessidade de monitorização contínua e de estratégias eficazes para controlar a disseminação de Enterococcus spp. com fenótipo de resistência a antibióticos em ambientes alimentares, de forma a garantir a segurança dos alimentos e proteção da saúde pública

ABSTRACT - Enterococcus are Gram-positive bacteria, frequently isolated from a variety of environments, including the gastrointestinal tract of humans and animals. In this context, the present study aimed to evaluate the hemolytic activity and antibiotic resistance phenotype of Enterococcus spp. isolated from food samples collected in university canteens and related surfaces. Over a period of five months, 67 food samples and 31 surface samples were collected. The samples were processed in the laboratory, and the dilutions were inoculated into culture medium Slanetz & Bartley and incubated at 37 °C. From these samples, 253 Enterococcus spp. were isolated, which were subsequently cultured on differential bile esculin azide agar medium, allowing the presumptive identification of 112 Enterococcus (66%) from food and 58 (34%) from related surfaces. The genetic diversity of the isolates was then evaluated using the RAPD-PCR technique (Random Amplified Polymorphic DNA - Polymerase Chain Reaction), resulting in the selection of 93 distinct profiles as representatives of the collection. Enterococcus spp. under study. After molecular identification at the species level, the isolates were classified as Enterococcus faecalis (58%), Enterococcus faecium (14%) or Enterococcus sp. (28%). Regarding hemolytic activity, the isolates were cultured in medium supplemented with 5% horse blood, and it was observed that 4% (3/69) of the food isolates showed positive activity. However, such activity was not detected in any of the surface isolates. Regarding antibiotic resistance, it was determined by the disk diffusion method. Thus, isolates from food and related surfaces demonstrated resistance to Quinupristin-Dalfopristin (54% food; 50% related surfaces), Rifampicin (38%; 63%), Erythromycin (25%; 8%), among others antibiotics, according to the criterion Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Using the criteria defined by European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST), resistance was observed to Quinupristin- Dalfopristin (68%; 83%), Streptomycin (32%; 33%), Teicoplanin (27%; 4%) and Levofloxacin (16%; 8%). In summary, the results indicated the presence of Enterococcus spp. in food and surfaces of university canteens, highlighting the need for continuous monitoring and effective strategies to control the spread of Enterococcus spp. with antibiotic resistance phenotype in food environments, in order to ensure food safety and protect public health