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- Gene expression and phenotypical analysis of winner and loser cells engaged in cell competitionPublication . Afonso, Alexandre Miguel Guedes da Silva; Queirós, Ana Cristina Alves; Casimiro, Sandra Cristina Cara de AnjoO cancro continua a ser um dos maiores focos da comunidade científica, o que resulta em milhares de estudos publicados anualmente com o intuito de mitigar o aparecimento e avanço desta doença, já que está associada a uma crescente taxa de mortalidade. Diversos destes estudos focam-se no processo de oncogénese e nos mecanismos que promovem ou previnem a mesma. Recentemente, o estudo da Competição Celular (CC) revelou que este processo possui um papel importante durante a progressão tumoral. A CC é um mecanismo através do qual células mais aptas (“winners”) são selecionadas, por meio de eliminação de células menos aptas (“losers”), e é descrito como estando envolvido em vários processos fisiológicos, como a homeostasia e regeneração dos tecidos e também em algumas patologias como o cancro e doenças neurodegenerativas. A função da CC durante a oncogénese é, contudo, dependente do contexto, podendo atuar como um supressor ou promotor tumoral. No primeiro caso, a CC identifica células que possuam alterações potencialmente carcinogénicas, como mutações no HRAS e a sobre expressão de ERBB2, e promove a sua eliminação, impedindo assim eventuais transformações neoplásicas. Por outro lado, a CC pode ser manipulada pelas células tumorais para estas adquirirem mais espaço para proliferar, através da eliminação das células não tumorais circundantes. Coincidentemente, vários marcadores de CC têm sido associados a um pior prognóstico dos pacientes. Assim sendo, torna-se imperativo compreender os mecanismos de CC presentes no desenvolvimento tumoral. No entanto, ainda são desconhecidos os fatores que condicionam as funções da CC no cancro, assim como os principais reguladores da mesma. Com base nas evidências referidas, o objetivo deste projeto foi a identificação de genes cuja expressão desencadeasse fenómenos de CC em células de cancro colorretal, e determinar os impactos fenotípicos da mesma nas células. Desta forma, foi usado um modelo de co-cultura entre duas linhas celulares de cancro colorretal, LoVo e LS 174T. Foi observado um aumento significativo na apoptose das células LoVo após 48h de co cultura, enquanto que as LS 174T apresentaram um aumento de viabilidade e proliferação, em comparação com as respetivas condições de monocultura. De acordo com a definição canónica de CC, os resultados sugerem que as células LoVo, quando colocadas em co-cultura com as células LS 174T, são classificadas como “losers” e eliminadas, ao passo que as últimas assumem o papel de “winners”. Esta eliminação é dependente das proporções de células “winner” em co-cultura, sendo que a taxa de apoptose é amplificada quando estas se encontram em maioria. No entanto, um aumento no número total de células em cultura, mantendo as proporções, resulta numa mitigação da eliminação das “loser”. Estes resultados não só comprovam que esta eliminação é dependente da área da superfície de contacto entre “winner” e “loser”, e não de fatores humorais libertados pelas “winner”, como também indicam que a mesma depende do espaço disponível para a proliferação celular. Curiosamente, as “loser” apresentaram uma eliminação menos pronunciada às 72h, e as “winner” mantiveram a sua viabilidade acrescida, sugerindo que a duração do efeito da CC é diferente nos dois tipos de células. De forma a averiguar se a apoptose observada é ativada por caspases, o mesmo ensaio foi repetido na presença de emricasam, um inibidor de caspases. A eliminação das células “loser” foi completamente inibida, apesar da viabilidade das células “winner” ter permanecido inalterada. Surpreendentemente, as “loser” demonstraram também uma maior viabilidade. Estes dados propõem que as células “loser” são eliminadas num processo mediado por caspases, e indicam que podem estar presentes fatores secretados que exercem o seu efeito nas células “winner”, mas também nas células “loser” quando a apoptose é inibida. Coincidentemente, já foi previamente descrita uma proliferação compensatória dependente de apoptose, na qual a morte das células “loser” resulta numa maior proliferação das células “winner”. No entanto, a inibição da apoptose não alterou a taxa de proliferação das células “winner”, o que sugere que a proliferação não é dependente da apoptose das “loser”. Devido à aparente correlação entre vários marcadores de CC e a presença de metástases, a capacidade de migração das duas linhas celulares em co-cultura foi avaliada. Os diversos ensaios revelaram um aumento da migração das células “winner”, acoplado a uma marcada sobre-expressão de vimentina, o que sugere que a CC intervém na transição epitélio-mesênquima. A CC pode atuar durante todas as etapas da doença oncológica e afetar a resposta à terapêutica, pelo que foi testada a resposta à quimioterapia no modelo de co-cultura. A presença de oxaliplatina causou um aumento da viabilidade das células LoVo e, em contrapartida, um incremento na apoptose das células LS 174T. Este efeito poderá dever-se à maior taxa de proliferação das células “winner” em co-cultura, o que as torna mais vulneráveis à citotoxicidade da quimioterapia usada. Porém, é possível que fatores externos alterem o contexto da CC, pelo que o “fitness” das células é relativo e dependente do ambiente no qual estas se encontram. Assim sendo, nestas condições, as LoVo agem como “winner”, eliminando as LS 174T que agora se comportam como “loser”. A ideia de que algo extrínseco às células influência a CC é inovadora, e evidencia que esta pode contribuir à eliminação de células mais invasivas aquando do tratamento com agentes quimioterapêuticos. Com o intuito de identificar quais os genes, e respetivas vias de sinalização, potencialmente implicados em CC, foi realizada uma análise do transcriptoma, através de RNA-Seq. Para tal, a expressão génica das células “winner” e “loser” em co-cultura foi comparada com a respetiva monocultura. Após análise bioinformática e validação independente por RT-qPCR dos genes diferencialmente expressos, 8 genes foram identificados como sendo sobre-expressos nas células “winner”, e 3 genes foram identificados como sub-expressos nas células “loser”, quando as mesmas se encontram em co-cultura. O knock-down (KD) dos 8 genes nas células “winner” permitiu avaliar os seus efeitos fenotípicos na co-cultura. O KD dos genes AQP3, MYT1 e NRIP1 em particular bloqueou por completo a eliminação das células “loser”, sugerindo que o aumento da expressão destes é crucial à eliminação das “loser” em CC. Adicionalmente, genes inseridos em vias de sinalização previamente implicadas na oncogénese foram igualmente validados por RT-qPCR. Os resultados expõem um aumento da sinalização mTOR e JAK/STAT nas células “winner”, e uma diminuição destas nas células “loser”, o que poderá explicar as diferenças observadas na viabilidade e proliferação celular. Este projeto permitiu associar, pela primeira vez, a CC à migração celular e à modulação da resposta à quimioterapia em cancro do cólon. Adicionalmente, foi possível a identificação de novos genes cuja sobre-expressão é essencial para a eliminação das células “loser”. Este projeto constitui não só uma valiosa adição ao conhecimento atual sobre os mecanismos que regem a CC, como também poderá contribuir para o desenvolvimento de potenciais terapêuticas que a bloqueiem, atrasando a progressão tumoral.
- A perspectiva de Rodrigo de Castro sobre as características do sangue menstrualPublication . Melo, António Maria Martins; Fernandes, José Sílvio Moreira; Pinheiro, Cristina Maria Nascimento Guerra dos Santos, 1974-The discussion on the characteristics of menstrual blood is a prominent topic in the gynaecological work by Rodrigo de Castro. In this paper, we aim to analyze the arguments set forth by the author and examine the key points of the reflection on menstruum signalling the construction of his opinion. Castro proves to be an attentive and critical reader of the tradition, summarizing the conventional views on the subject and providing a conceptual framework according to which menstrual blood is positively considered.
- Tráfico internacional de mulheres para fins de exploração sexual : estudo comparativo dos ordenamentos jurídicos português e brasileiroPublication . Morele, Karina Ribeiro; Graes, IsabelA presente dissertação tem como objetivo debater sobre o tráfico internacional de mulheres para fins de exploração sexual, demonstrando como a desigualdade de gênero está diretamente ligada ao crime de tráfico de pessoas para fins de exploração sexual, tendo em vista o forte legado patriarcal presente na sociedade internacional. Busca-se estudar sinteticamente, com base na comparação entre os dois países objetos de análise, Brasil e Portugal, o perfil das mulheres vítimas deste crime, além das legislações, tratados e políticas públicas que dispõem sobre o tema. Ademais, pretende-se demonstrar como ocorreu a evolução das conquistas das mulheres e seu reconhecimento como pessoa independente de direitos, tanto internacionalmente como nos dois países citados.
- The Role of the Seismically Slow Central‐East Atlantic Anomaly in the Genesis of the Canary and Madeira Volcanic ProvincesPublication . Civiero, Chiara; Custódio, Susana; Neres, Marta; Schlaphorst, David; Mata, João; Silveira, GraçaThe Canary and Madeira provinces in the Central-East Atlantic Ocean are characterized by an irregular spatio-temporal distribution of volcanism along the hotspot tracks, and several alternative scenarios have been suggested to explain it. Here, we combine results from seismic tomography, shear-wave splitting and gravity along with plate reconstruction constraints to investigate the mantle structure and dynamics beneath those provinces. We find that the Central-East Atlantic Anomaly (CEAA), which rises from the core-mantle boundary and stalls in the topmost lower mantle, is the deep source of distinct upper-mantle upwellings beneath the region. The upwellings detach intermittently from the top of the CEAA and appear to be at different evolutionary stages. We argue that the accumulation of plume material in the topmost lower mantle can play a key role in governing the first-order spatio-temporal irregularities in the distribution of hotspot volcanism.
- Fuzileiro marinheiro e artilheiro marítimo: instrução ao soldado da Brigada Real da Marinha em Portugal nos finais do Antigo RegimePublication . Laurentino, Fábio Neves Luiz; Rodrigues, José Damião; Cruz, Miguel Dantas daA seguinte dissertação tem como objetivo estudar o método de instrução militar naval dado a um soldado recruta, recém incorporado à vida militar, utilizado no início do século XIX pelo corpo vocacionado para guarnecer a artilharia das embarcações de guerra e atuar como infantaria de desembarque da Marinha Real portuguesa, a Brigada Real da Marinha. Para trazer à luz vivências de inserção a um mundo novo, o mundo militar (pautado pelas suas próprias características e ethos), escolheu-se como documento base o livro Instruções para a Brigada Real da Marinha, principiando pela escola do soldado até a de pelotão, um compêndio de instruções contemporâneo as políticas de reorganização e modernização de uma Marinha cuja a necessidade de proteção do comércio marítimo com o Atlântico e a percepção da ameaça de uma guerra com a França Revolucionária lhe fizera reestruturar-se. Desta forma, a instrução para soldados é uma preocupação presente neste período e essencial neste processo de modernização, mostrando-a primordial para dominar a tecnologia vigente.