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- Hit optimization to improve aqueous solubility of compounds with antimycobacterial activityPublication . Freitas, Elisabete Cristina Silva; Lopes, Francisca da Conceição; Harjivan, ShrikaA tuberculose (TB) é uma doença infeciosa causada pelo Mycobacterium tuberculosis (Mtb) e é considerada uma das 10 principais causas de morte a nível mundial e a principal devida a um único agente. Em 2018 foram reportados 10 milhões de novos casos e 1,5 milhões de mortes. É considerada um perigo para a saúde pública devido ao contínuo aparecimento de novos casos, bem como ao crescimento da resistência antimicrobiana associada aos fármacos atualmente disponíveis. Em pacientes infetados com HIV (Vírus da Imunodeficiência Adquirida), a TB representa a principal causa de morte, sendo a probabilidade de desenvolverem a doença 19 vezes superior quando comparados com pacientes não infetados com HIV. A Organização Mundial da Saúde estima que cerca de 23% da população (1,7 mil milhões de pessoas) tem TB latente. Esta forma da patologia observa-se quando o sistema imunitário é capaz de controlar a propagação do Mtb. Contudo, não apresenta sintomas, o que torna difícil a sua deteção e, caso o sistema imunitário do hospedeiro seja comprometido, pode levar a uma reativação causando, consequentemente, TB ativa. Portanto, pessoas com TB latente representam uma fonte de contaminação e propagação da doença. Fatores como a ausência de uma vacina totalmente eficaz, a longa duração dos tratamentos e o lento desenvolvimento de novos medicamentos, torna difícil a erradicação da TB. O mecanismo de infeção começa com a inalação dos bacilos que, dada a sua reduzida dimensão, conseguem chegar aos alvéolos pulmonares. Seguidamente são fagocitados por macrófagos que têm a capacidade de recrutar outras células imunológicas para o local da infeção. Este recrutamento levará à formação de uma estrutura que impedirá a propagação dos bacilos, denominada granuloma. Esta é tão favorável para o bacilo quanto para o hospedeiro, uma vez que, se por um lado o granuloma impede que o Mtb se espalhe (causando lesões nos pulmões e outros órgãos), por outro lado, o Mtb dentro do granuloma consegue sobreviver, apesar de se encontrar num estado não-replicativo. Na maioria dos casos, o granuloma é suficiente para conter o bacilo, contudo, aquando de um enfraquecimento do sistema imunitário do hospedeiro, o Mtb pode ser libertado e levar ao desenvolvimento de TB ativa. O precoce diagnóstico e correto tratamento são as principais ferramentas para o controlo da doença. A deteção da TB latente pode ser feita in vivo, através do teste da tuberculina complementado com Raios-X ao tórax e análise da expetoração, ou in vitro, pelo ensaio de libertação de interferon-gama. De maneira a providenciar a terapia mais adequada, é realizado um teste de suscetibilidade aos fármacos, possibilitando a deteção de resistências. As várias resistências contra os fármacos atualmente disponíveis constituem um grande perigo na luta contra a TB. Atualmente, estão descritos quatro tipos de resistência, TB resistente à rifampicina; TB multi-resistente, quando resistente pelo menos à isoniazida e rifampicina; TB extensivamente-resistente, em casos onde se observa resistência a todos os fármacos de primeira linha, bem como a pelo menos uma fluoroquinolona e um injetável; e, por fim, TB totalmente-resistente, descrita como resistente a todos os fármacos de primeira e segunda linha. A resistência pode ser transmitida ou adquirida, sendo a primeira o resultado da transmissão direta de estirpes resistentes no momento da infeção, por parte de uma pessoa infetada com a estirpe resistente; e a segunda, consequência do aparecimento de mutações. Estas mutações são maioritariamente espontâneas e observadas em genes que codificam para as proteínas alvo dos fármacos. O atual tratamento da TB suscetível a fármacos inclui seis meses de tratamento, aplicando nos primeiros 2 meses uma terapia com isoniazida, rifampicina, pirazinamida e etambutol, seguidos de 4 meses com isoniazida e rifampicina. Estes fármacos de primeira geração têm como alvo enzimas essenciais ao funcionamento do bacilo, como por exemplo, enzimas envolvidos na síntese de componentes da membrana celular e na síntese proteica. A bedaquilina e a delamanida, fármacos recentemente aprovados, são usados para o tratamento da TB multi-resistente, sendo ambos ativos contra as formas replicantes e não-replicantes do bacilo e contra estirpes suscetíveis e resistentes aos fármacos. Através de um screening contra o Mtb (estirpe H37Rv) de uma biblioteca de compostos do nosso laboratório foi observado que a classe das azaauronas exibia atividade inibitória promissora. Contudo, estes compostos apresentavam problemas relativamente à solubilidade aquosa. Assim sendo, novos compostos foram sintetizados com o objetivo de melhorar a solubilidade aquosa, tentando manter a atividade antimicrobiana que apresentavam. A via sintética das azaaurones inclui quatro passos: (1) acilação de uma anilina usando cloroacetonitrilo, (2) proteção do grupo amina da anilina com grupos acetilo, carbamoilo e benzoilo, (3) ciclização intramolecular, e (4) condensação aldólica. Neste trabalho realizaram-se várias tentativas de otimização dos rendimentos obtidos no passo da ciclização (passo 3), tendo-se testado diferentes bases (com diferentes forças) e o número de equivalentes dos reagentes. Os melhores resultados foram conseguidos com trietilamina (3 eq, 69%) e K2CO3 (1.2 eq, 56%) para os derivados N-acetilo e N-carbamoilo, respetivamente. Foi possível sintetizar uma pequena biblioteca de novos compostos (4b-d, f), com rendimentos moderados a bons. Estes foram caraterizados por 1H NMR, 13C NMR, COSY, HSQC, HMBC e espectrometria de massa. O grau de pureza foi determinado por HPLC. Como mencionado anteriormente, as azaauronas iniciais não apresentavam bons valores de solubilidade o que representa uma grande desvantagem destes compostos dado que a solubilidade é umas das principais e mais importantes propriedades físico-químicas dos compostos na descoberta e desenvolvimento de fármacos. Compostos com reduzida solubilidade aquosa estão associados a problemas de má absorção, e consequentemente, reduzida biodisponibilidade, podendo também afetar os ensaios biológicos, SAR e atividade farmacológica. Assim sendo, é importante determinar este parâmetro o mais cedo possível, para evitar posteriores complicações em fases avançadas do processo de desenvolvimento do fármaco. Existem dois tipos de solubilidade, a termodinâmica e a cinética, que podem ser determinadas dependendo da informação pretendida. Essencialmente, a solubilidade termodinâmica reflete “Até que ponto o composto dissolve?”, e, inversamente, a solubilidade cinética representa “Até que ponto o composto precipita?”. A solubilidade cinética e a termodinâmica apresentam várias diferenças. Nos métodos de determinação da solubilidade cinética, o ensaio começa com o composto previamente dissolvido num solvente orgânico (normalmente, DMSO), ao contrário do que se verifica nos métodos termodinâmicos, que utilizam o composto no estado sólido. Os métodos cinéticos são normalmente utilizados na fase inicial da descoberta de fármacos, dada a facilidade e rapidez dos mesmos; contrariamente ao que se verifica para os métodos termodinâmicos, aplicados em fases posteriores. Neste trabalho foi desenvolvido um método analítico para determinar a solubilidade cinética. Este método consistiu na adição do composto (pré-dissolvido em DMSO) em tampão fosfato e, depois da incubação e centrifugação, o sobrenadante foi analisado por HPLC. As condições do HPLC foram otimizadas para todos os compostos bem como para o padrão utilizado (ácido salicílico). O valor de solubilidade foi determinado através de uma curva de calibração em DSMO. O objetivo de melhorar a solubilidade foi cumprido, quando comparado com o composto inicial 4a, apesar de ter sido observada uma diminuição da atividade para os compostos sintetizados. Esta redução da atividade pode estar relacionada com o perfil lipofílico da membrana celular do Mtb. Foi analisada a possibilidade de estabelecer uma correlação entre a solubilidade e a atividade, contudo não foi possível dado o reduzido número de compostos. Futuramente, deverá ser alargada a biblioteca de derivados de azaauronas, sintetizando compostos com diferentes grupos introduzidos na posição R2 (Figure 8). Tal deverá permitir estabelecer SAR e, também, uma correlação entre a atividade e a solubilidade aquosa para esta família de compostos.
- Practices and experiences of incarceration : an inquiry into Papéis da Prisão by José Luandino VieiraPublication . Scaraggi, Elisa; Araújo, Susana Isabel Arsénio Nunes Costa; Vecchi, RobertoConsidered one of the fathers of Angolan literature and one among the most important contemporary writers in Portuguese, in 1961 José Luandino Vieira was arrested because of his participation to the struggle for independence in Angola. He would spend the next twelve years in confinement, first in Luanda and later in the notorious Tarrafal prison camp (Cabo Verde). While in detention, Vieira wrote most of his literary works, alongside a series of notebooks in which he reported his thoughts, feelings and literary and political considerations. Forty years after the independence of Angola, Vieira’s notebooks were published in a volume titled Papéis da prisão: Apontamentos, diário, correspondência (1962-1971). In this dissertation, I focus on the intersections between history, literature and the writing of the self that can be observed in Vieira’s prison writings. I defend that, while the prison diaries cast a new light on the writer’s literary production, they can also bring new elements to the history of Angola, having an impact on how the history of the struggle will be remembered in the future. Starting from a reflection on the issue of punishment and on prison as an instrument of social control, I question how the writings related to their locale of production, how the carceral experience had shaped them and how it was reflected in them.
- Referenciais de segurança dos alimentos : estudo comparativo entre ISO 22000 e FSSC 22000 quando aplicado a uma unidade de processamento de carnePublication . Matos, Suzana Ferreira de; Costa, Pascoal Lopes Freitas da; Fraqueza, Maria João dos RamosA crescente preocupação e exigência dos consumidores relativamente à segurança dos alimentos que lhes são fornecidos, leva à necessidade de todos os intervenientes da cadeia alimentar melhorarem a implementação de normas de segurança e qualidade e reforçarem todos os sistemas de gestão e controlo, desde a produção primária até ao consumidor final. O presente trabalho teve como objetivo principal, a implementação de um referencial de segurança dos alimentos, FSSC 22000, numa unidade de processamento de carnes de forma a comprovar a sua aptidão para fornecer produtos seguros, cumprindo os requisitos legais e acompanhando as exigências de um mercado cada vez mais competitivo e exigente. Como resultado do trabalho realizado ao longo do estágio, foram atualizados alguns documentos já pré-existentes, no âmbito da implementação da NP EN ISO 22000:2005, nomeadamente os fluxogramas de processo, a descrição das etapas e medidas de controlo, revisão da análise de potenciais perigos com nova categorização das medidas de controlo, revisão do Programa de Pré-Requisitos Operacionais, revisão do Plano HACCP e por fim validação, verificação e melhoria do Sistema de Gestão de Segurança Alimentar, nomeadamente das medidas de controlo de forma a estar conforme os requisitos da norma FSSC 22000. Foi igualmente elaborado um estudo comparativo entre o referencial NP EN ISO 22000:2005 e FSSC 22000 no qual foi verificado uma divergência nos requisitos exigidos e na estrutura dos referenciais. De forma a colmatar esta divergência foram aplicados esforços para cumprir com os requisitos exigidos o que levou à criação de novas etapas de processo nas diferentes etapas de produção, novos tipos de potenciais perigos identificados e por fim respetivas medidas preventivas. Verificou-se que com o esforço e empenho de todos os operadores, a unidade de processamento possuía todas as capacidades para implementar com sucesso, o referencial de segurança dos alimentos em questão.
- Intervenção psicomotora no Agrupamento Vertical de Almeida Garrett: o psicomotricista em contexto escolar e os jogos populares tradicionais portugueses como promotores do brincarPublication . Martins, Sónia da Sliva; Brandão, Maria Teresa Perlico MachadoO presente documento foi elaborado no âmbito do mestrado em Reabilitação Psicomotora na Faculdade de Motricidade Humana, no ramo de aprofundamento de competências profissionais. Foi realizado um estágio no Agrupamento Vertical de Almeida Garrett, em Alfragide, trabalhando-se com crianças em idade escolar (1.º ciclo) e pré-escolar. Em contexto individual acompanharam-se 12 crianças, com dificuldades variadas, a maioria sem diagnóstico clínico e ao abrigo do decreto-lei n.º 3/2008. Paralelamente implementouse um projeto baseado nos jogos populares tradicionais, em contexto de recreio, com o objetivo geral de promover competências socio emocionais, numa escola com altos níveis de insucesso escolar e problemas de comportamento. Será feito o enquadramento do agrupamento, da legislação referente à inclusão educativa em vigor durante o período de estágio, apresentados dois estudos de caso, em níveis de ensino diferentes e apresentados os restes casos de uma forma sumária. Além dos instrumentos de avaliação já existentes, serão ainda apresentados dois elaborados no decorrer do estágio e centrados no domínio “autonomia”. O primeiro pretende recolher informações sobre a autonomia da criança em casa e, o segundo, a perceção da criança sobre a sua própria autonomia. Realizou-se um trabalho de pesquisa acerca do brincar e a sua pertinência para a psicomotricidade.