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- YB-1 expression in breast cancer: modulation of receptor status and therapeutic implicationsPublication . Alves, Patrícia Borges, 1993-; Casimiro, Sandra Cristina Cara de Anjo, 1973-O cancro da mama é o segundo cancro mais frequente a nível mundial, sendo o mais incidente entre as mulheres. Apesar dos importantes avanços terapêuticos, o cancro da mama metastático continua a estar associado à maior taxa de mortalidade por cancro entre as mulheres. O cancro da mama é uma doença bastante heterogénea que engloba vários subtipos histológicos e moleculares que influenciam o comportamento, a agressividade tumoral, e consequentemente, o prognóstico clínico. A classificação de cancro da mama com base na expressão molecular do receptor de estrogénio (RE), do receptor de progesterona (RP), do receptor 2 do factor de crescimento (HER2) e do índice proliferativo (Ki-67) tem particular interesse clínico e implicações terapêuticas. Do ponto de vista clínico, existem três subtipos de cancro da mama com maior relevância: o subtipo luminal com dois subgrupos: Luminal A (RE+ e/ou RP+, HER2-, Ki67 baixo) e Luminal B (RE+ e/ou RP+, HER2+ ou Ki67 elevado); o subtipo com sobreexpressão de HER2 ou HER2+ (RE-, PR-, HER2+); e o subtipo triplo negativo (RE-, RP- HER2-). O cancro de mama luminal é o mais comum, correspondendo a cerca de 60% de todos os casos, sendo também o menos agressivo. Uma vez que é caracterizado pela expressão de receptores hormonais e o seu crescimento é hormono-dependente, os doentes com cancro da mama luminal beneficiam de tratamento com hormono-terapia. As opções terapêuticas são várias e incluem o tamoxifeno e o fulvestrant que, por mecanismos diferentes, têm afinidade para o RE, impedindo a ligação do estrogénio e levando ao bloqueio da principal via de sinalização implicada na proliferação das células tumorais. No entanto, cerca de 30% dos casos de cancro de mama luminal torna-se resistente à terapia e os doentes vêm a desenvolver cancro metastático. O cancro metastático é a maior causa de morte por cancro e é considerado o maior desafio quer para os médicos e doentes, quer para a investigação. Assim, é muito importante descobrir novos mecanismos de resistência à terapia, bem como biomarcadores de prognóstico e/ou preditivos de resposta às diversas opções terapêuticas. A YB-1 é uma proteína multifuncional, que pertence à familia de proteinas Y-Box Binding Proteins e que está envolvida em vários processos celulares importantes para o crescimento e o desenvolvimento celular. Geralmente localizada no citoplasma da célula, uma vez activada por fosforilação a YB-1 é translocada para o núcleo onde actua como factor de transcrição e promove a expressão de genes associados ao crescimento, ao ciclo celular e à quimio-resistência. Vários estudos demonstraram o papel oncogénico da YB-1, que foi já associada a todos os hallmarks do cancro. Em relação ao cancro da mama, especificamente, a expressão elevada de YB-1 está associada ao subtipo molecular triplo negativo e a um pior prognóstico dos doentes. Nesta dissertação propusemos estudar a proteína YB-1 em cancro da mama luminal. Neste tipo de cancro, foi já demonstrado in vitro que a expressão aumentada de YB-1 está associada à perda da expressão de RE e resistência à hormono-terapia, e ao aumento da transcrição de HER2. Desta forma, colocámos a hipótese de que a expressão elevada de YB-1 em tumores primários de cancro da mama RE+ pode não só estar associada a um mau prognóstico, mas também à resistência à hormono-terapia e à perda de RE nas metástases. Para abordar esta hipótese, avaliámos retrospectivamente a associação entre YB-1 e p-YB-1 e a sobrevida livre de doença e sobrevida global, usando uma coorte de 80 tumores primários e 51 metástases emparelhadas. Avaliámos ainda uma possível associação com alterações no RE, RP e HER2 nas metástases. Os níveis de proteína foram detectados por imunohistoquímica e as amostras foram avaliadas por dois médicos patologistas independentes. Os resultados mostram que níveis elevados de YB-1 ou a localização nuclear de p-YB-1 estão associados à ausência de RE (p=0,0383 e p=0,0306, respectivamente). Em relação aos outcomes clínicos, a elevada expressão de YB-1 nos tumores, bem como a localização nuclear de YB-1 ou p-YB-1, mostraram estar associadas a menor sobrevivência global (p=0,0437; p=0,0221 e p=0,0163, respectivamente). Embora não tenha sido clara uma associação entre a expressão de YB-1 e as alterações moleculares que se observaram entre os tumores primários e as metástases, 45,8% das metástases com status molecular diferente do tumor primário, eram positivas para YB-1 nuclear, em comparação com 37% sem YB-1 nuclear. Globalmente, a nossa análise de amostras de cancro da mama humano corrobora a importância da YB-1 como biomarcador de mau prognóstico e mostra que esta proteína está implicada na negatividade de RE. Além disso, conseguimos mostrar pela primeira vez que a hormono-terapia adjuvante pode estar implicada na seleção de clones com expressão elevada de YB-1 e que isto pode estar associado com o pior prognóstico de doentes com tumores com elevada expressão de YB-1. Assim, também questionámos se a resistência adquirida à hormono-terapia em cancro da mama RE+ é acompanhada por uma alteração na expressão de YB-1; e sendo assim, se isso afecta a sensibilidade a outras terapias alvo. Para responder a essas questões, seleccionámos in vitro linhas celulares com resistência adquirida a diferentes terapias e avaliámos: a expressão de YB-1, RE, RP, HER2 e Ciclina D1; e a sensibilidade à hormono-terapia, terapia anti-HER2, e inibidores de mTOR e CDK4/6, actualmente usados como agentes únicos ou em combinação, para tratar cancro da mama luminal. Os nossos resultados mostram que a sobreexpressão de YB-1 em células de cancro da mama luminal, MCF-7, leva à diminuição da expressão de receptores hormonais (RE e RP), e aumenta ligeiramente a expressão de HER2. Em consequência, estas células tornam-se menos sensíveis à hormono-terapia (tamoxifeno e fulvestrano) e mais sensíveis à terapia anti-HER2 (lapatinib). De seguida, e para testar se a expressão de YB-1 estaria associada à resistência adquirida, mantivemos quatro linhas celulares de cancro da mama luminal expostas a baixas concentrações de fármacos diferentes por um periodo de cinco meses e avaliámos os níveis de expressão de YB-1, bem como os níveis de expressão dos receptores hormonais RE, RP e HER2. Os nossos resultados mostram que as células MCF-7 resistentes aos fármacos têm uma diminuição na expressão dos receptores hormonais e Ciclina D1, embora não tenham sido detectadas diferenças nos níveis de expressão de YB-1. Em concordância com estes resultados, a linha celular derivada de MCF-7 e resistente ao tamoxifeno apresentou uma menor taxa proliferativa e com menor dependência do estradiol, quando comparada com a linha parental não tratada. No entanto, as linhas celulares derivadas de T47D resistentes ao tamoxifeno, fulvestrano e lapatinib mostram ter um aumento de YBX1, ESR1 e ERBB2, embora nem sempre se traduza num aumento ao nível da proteína. Adicionalmente, avaliámos a resposta das linhas celulares derivadas de MCF-7 e T47D resistentes à hormono-terapia, a três terapias usadas na clínica para cancro da mama luminal metastático: lapatinib (anti-HER2), everolimus (inibidor do mTOR) e palbociclib (inibidor da CDK4/6). Curiosamente, os clones resistentes à hormono-terapia não se tornam mais resistentes às terapias alternativas, havendo até uma tendência para serem mais sensíveis, em especial a linha MCF-7 resistente ao Fulvestrano. Em conclusão, os nossos resultados demonstram que a proteína YB-1 está associada a um pior prognóstico em cancro da mama e que a sua expressão se correlaciona negativamente com os níveis de RE. Assim, esta proteína poderá ser um biomarcador de resposta à terapia em cancro da mama luminal, uma vez que a terapia standard é direccionada para o RE.
- Encapsulação de um extrato rico em portisinas através de tecnologia de alta pressão assistida por dióxido de carbono supercrítico (PGSS®)Publication . Conceição, Ana Filipa Lopes da; Matias, Ana Alexandra Figueiredo; Bronze, Maria do RosárioUma nova classe de compostos derivados das antocianinas denominados por portisinas foram detetados em amostras de vinho do porto com dois anos de envelhecimento. Desde então estes compostos têm sido estudados em várias vertentes que vão desde o mecanismo de síntese, a sua utilização como pigmento natural de cor azul em condições ácidas e ainda estudo da sua bioatividade (potencial antioxidante, atividade anti-inflamatória, atividade na doença cardiovascular, entre outras). O principal objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento de tecnologias limpas para a estabilização e aumento da solubilidade em matrizes lipídicas de um extrato rico em portisinas (ERP). Neste âmbito, uma tecnologia de fluidos supercríticos, o PGSS® (Partículas a partir de soluções saturadas de gás), foi usada para obtenção de partículas de base lipídica de forma a aumentar a estabilidade do ERP e por conseguinte a sua solubilidade em matrizes lipofilicas. Foram testadas diferentes variáveis do processo (pressão, temperatura e %ERP), com o objetivo de maximizar o teor do ERP nas partículas obtidas por PGSS ® . Recorreu-se ao desenho factorial de experiências (Full factorial design of experiments) com dois níveis e para otimizar as condições da encapsulação foi usada a Metodologia de Superfícies de Resposta. Assim as respostas selecionadas para o estudo foram a quantidade de ERP encapsulado (Load), a eficiência de encapsulação do processo e o parâmetro da cor L* (luminosidade). Os resultados obtidos pelo programa MODDE, indicam que quanto maior a %ERP menor é a luminosidade e maior é o Load das partículas, ao passo que nenhum parâmetro afetou a eficiência de encapsulação (ensaio N5 e N8 tiveram as maiores eficiências: 91,91% e 91,67% respetivamente). As partículas obtidas foram sujeitas a caracterização física e química. A morfologia foi avaliada pela técnica de SEM (Scanning electron microscopy) apresentando as partículas a forma de flocos e tamanho irregular. Realizaram-se dois estudos de estabilidade/envelhecimento das partículas tendo sido testadas duas formas de armazenamento e avaliados os parâmetros de cor. Os resultados mostram que as partículas armazenadas em atmosfera de azoto são estáveis até ao 169º dia do estudo e as que foram conservadas em atmosfera de ar são estáveis até ao 28º dia.
- A terapia psicomotora no CAO - C.E.C.D. Mira Sintra : dificuldades intelectuais e desenvolvimentaisPublication . Silva, Rui Paulo Almeida da; Morato, Pedro Jorge Moreira de ParrotO relatório retrata o trabalho desenvolvido ao longo do estágio curricular, inserido no Ramo de Aprofundamento de Competências Profissionais do Mestrado em Reabilitação Psicomotora, realizado no Centro de Atividades Ocupacionais (CAO) do Centro de Educação para o Cidadão com Deficiência (C.E.C.D.). O estágio teve aproximadamente a duração de oito meses tendo como população-alvo adultos com Dificuldades Intelectuais e Desenvolvimentais (DID). Durante o estágio o estagiário teve a possibilidade de participar em diversas vivências institucionais e também de realizar Terapia Psicomotora, em contexto de ginásio, Atividade Motora Adaptada, Meio Aquático e Equitação Terapêutica. O objetivo principal da intervenção focou-se na manutenção de competências psicomotoras, tendo em vista a melhoria da qualidade de vida das mesmas. No presente relatório inicialmente será apresentado um enquadramento da prática profissional, fazendo uma caracterização da instituição, população-alvo e sobre alguns aspetos inerentes ao estágio. Posteriormente serão apresentadas as etapas do estágio, a descrição dos grupos de intervenção, planos, resultados e dificuldades sentidas. Na parte final do relatório será apresentada uma reflexão final sobre as aprendizagens feitas durante o estágio.
- A responsabilidade tributária dos administradores, gerentes e diretores de pessoas coletivas e entes fiscalmente equiparados no ordenamento jurídico caboverdianoPublication . Brito, Eydira Vieira Morais; Courinha, Gustavo LopesCabo Verde, tal como vários países, tanto da comunidade lusófona quanto de outras realidades, vem estabelecer um regime de Responsabilidade Tributária dos Administradores, Gestores e Diretores de entidades coletivas, no art. 22º do CGT. Trata-se de uma responsabilidade subsidiária, que se efetiva pela reversão do processo de execução fiscal, sendo necessário para tal, que se verifiquem determinados pressupostos, a saber, a conduta do gestor, a ilicitude da conduta, consubstanciando-se na violação das normas legais ou contratuais de protecção dos credores, a culpa pela diminuição do património da pessoa coletiva ou ente fiscalmente equiparado, que se afere em função do critério do gestor criterioso e diligente, o dano e o nexo de causalidade entre a conduta e dano efetivo. Daí que se pode concluir que se pode reconduzi-la à figura da responsabilidade civil. No entanto, outros pressupostos se afiguram necessários para que ocorra essa reversão, até porque o responsável é garante da dívida tributária, o que leva alguns a entender que se trata de uma fiança legal. Nenhuma das posições é suficiente, pelo que se consagra como uma figura própria do Direito Tributário.
- Analysis of TIM2 deficiency in the mouse retinaPublication . Valença, Andreia Barbosa; Ruberte París, Jesús; Jorge, Maria Luísa MendesCareful control of iron availability in the retina is central to maintenance of iron homeostasis, as its imbalance is associated with oxidative stress and progress of several retinopathies, such as diabetic retinopathy. Ferritin, known for its role in iron storage and detoxification, has also been proposed as an iron-transporter and can be regarded as a potential deliverer of a considerable large amount of iron to the retina compared to transferrin, the classical ironcarrier protein. Ferritin can bind to scavenger receptor class A member 5 (Scara5) and T-cell immunoglobulin and mucin-domain 2 (TIM2) receptors and is likely endocytosed. In this study, the presence of TIM2, which remained unknown in the retina, was investigated. Although no human ortholog for mouse TIM2 has been identified, human TIM1 and mouse TIM2 have similar functions. Our results revealed for the first time the presence of TIM2 receptors in the mouse retina, mainly expressed in Müller cells, unveiling new aspects of retinal iron metabolism regarding the putative role of TIM2 in this tissue. A knockout mouse for this membrane receptor was generated in order to better understand TIM2 functions in the retina. TIM2 deficiency affected retinal iron metabolism. Iron-loaded ferritin accumulation, probably due to increased ferritin uptake mediated by Scara5, and increased iron uptake by transferrin receptor 1 (TfR1)- transferrin binding led to retinal iron overload. Consequently, increased vascular permeability and blood-retinal barrier (BRB) breakdown were observed, inducing edema of the central retina. Paracellular and transcellular transports were impaired with tight junction integrity loss and increased caveolae number. Two mechanisms seem to be involved in this process: association of iron and ferritin overload with vascular endothelial growth factor (VEGF) overexpression and oxidative stress triggered by reactive oxygen species (ROS) overproduction generated by retinal iron overload. Altogether, these results point to TIM2 as a new key player in iron homeostasis in the mouse retina, possibly modulating cellular iron levels, and a potential target for the treatment of diabetic macular edema.
- Em defesa do Estado socialPublication . Silva, Michelle Valéria Macedo; Brito, Miguel Nogueira deO sucesso de uma cooperação humana social justa pautada no liberalismo depende da grande adesão voluntária dos membros da sociedade a uma democracia constitucional. O aumento da confiança depositada nas intituições básicas da sociedade depende da adoção de princípios de justiça baseados em métodos comparativos, como bem observou Amartya Sen. Contudo, diante da dúvida acerca da veracidade de dados comparativos fidedignos da realidade, melhor serem tomadas decisões mais justas com base nos princípios transcendentais de justiça como equidade eleitos por John Rawls. Para a efetividade dos direitos de liberdade é necessária a promoção de direitos sociais. O Estado Social é fundamental para o alcance da igualdade de oportunidades/capacidades. Sem a promoção dessas igualdades materiais, os direitos de liberdade não passarão de títulos formais inefetivos declarados a todos. Os custos sociais decorrentes do aumento de bens públicos constituem investimentos para o alcance da prosperidade do país. A saída racional de momentos de crise requer não só a manutenção do Estado Social, como o seu fortalecimento. Somente a promoção de direitos sociais em larga escala traz de volta a confiança dos investidores no mercado diante da visão da bonância do futuro. A promoção de direitos sociais fortalece a circulação de riquezas necessária para o aquecimento da economia. Reformas tributárias baseadas em tributos progressivos, aliados à redução de rendas e dividendos não tributáveis, auxiliam na desconcentração de riquezas e, por conseguinte, da mesma forma alavancam o crescimento do país. Políticas de austeridade que preconizam redução de gastos, precarização de relações trabalhistas e flexibilização de previdência social não produzem o efeito acima exposto. Essas aspirações neoliberais servem apenas para aumentar as desigualdades sociais do país. Buscam a redução do Estado Social como forma de corte de gastos públicos, sem impulsionar o mercado. Certo é que políticas de austeridade conduzirão a um quadro social deplorável, caracterizado por desemprego e grande parte da população na extrema pobreza, uma vez que a base da pirâmide suportará sozinha os efeitos da austeridade estatal. Por fim, o efeito produzido é o contrário: desconfiança dos investidores no mercado livre. O Estado Social forte é a única saída para a reversão deste cenário catastrófico.
- Caracterização do aporte hídrico em idosos portugueses da comunidade : análise de dados do Projeto PEN-3SPublication . Matos, Andreia Inês de Abreu, 1991-; Nicola, Paulo; Camolas, José Miguel LopesIntrodução: A água tem um papel fundamental no bom funcionamento e sobrevivência dos seres humanos. Mas com o avançar da idade são, várias as patologias que surgem manifestando-se em alterações (diminuição da perceção da sensação de sede, dificuldade de mobilidade, alteração cognitiva e sensorial), que paulatinamente vão condicionar a ingestão de água. Objetivo: Este trabalho de investigação visa caracterizar o consumo de água contida em bebidas ingeridas pelos idosos portugueses residentes na comunidade. Metodologia: Este estudo transversal faz parte do projeto nacional intitulado: “Estado nutricional dos idosos portugueses: Estudo de prevalência nacional e construção de um sistema de vigilância” (PEN-3S). A análise descritiva foi feita com dados obtidos de três questionários (Questionário Geral, Questionário Propensão Alimentar e Mini Nutricional Assessment). Resultados: A amostra representativa a nível nacional (Região Continental e Autónomas) constituída por 920 idosos, com mais de 65 anos sem limite etário. No estudo realça-se que o sexo masculino (50,9%), idosos com 65 aos 74 anos (52,3%) e os com mais 85 anos (18,0%) tem maior consumo de copos ou chávenas de bebida por dia. Observou-se que os idosos reformados (95,5%) e sem escolaridade (18,6%) consumiam mais que três copos ou chávenas de bebida por dia. Quanto aos idosos solteiros e divorciados/viúvos associou-se ao consumo de mais que três copos ou chávenas de bebida por dia (p<0,05). Observou-se que os idosos que referiram rendimentos mais baixos (<485€ - 1455€) consumiam com maior frequência mais que três copos ou chávenas de bebidas por dia (p<0,01). Quanto as regiões do país, Algarve, Madeira, Alente-jo Lisboa e Vale do Tejo, referiram ingerir mais que três copos ou chávenas por dia (p<0,001). Em relação as doenças, verificou-se que idosos relataram ter hipertensão arterial consumiam mais que três copos ou chávenas de bebidas por dia (p<0,01). Quanto a doença gastrointestinal, idosos que tem essa doen-ça consumiam mais de três copos ou chávenas de bebida por dia (p<0,05). Quando observamos a média de doenças relatadas associou-se ao consumo de mais de três copos ou chávenas de bebida por dia (p<0,01). Discussão: Através de outros estudos realizados na população portuguesa, pode-se constatar que os resultados obtidos neste trabalho são os esperados. Verificando-se que grande parte dos idosos do estudo não consume grandes fontes de hidratação (bebidas), pelo qual uma das causas pode estar associada a perceção da pergunta sobre o consumo de bebidas. Conclusão: Dado o envelhecimento da população portuguesa, é necessário urgentemente campanhas de sensibilização para importância do consumo de água contida em bebidas, sendo fundamental o conhecimento por parte dos mesmos e dos cuidadores, dos valores padrões de consumo de água para este segmento da população.