Loading...
Publication
Identification of circulating microRNAs as biomarkers of feline mammary carcinoma
| Name: | Description: | Size: | Format: | |
|---|---|---|---|---|
| 2.39 MB | Adobe PDF |
Abstract(s)
Feline mammary carcinomas (FMC) are very aggressive and, even after radical mastectomy, are usually fatal due to metastasis. Therefore, diagnostic tools allowing earlier detection and more effective treatment options are urgent. MicroRNAs (miRNAs) regulate gene expression and have been found to be altered in several cancer types, including breast cancer (BC). There are no studies yet evaluating miRNAs in feline cancers, thus this study aimed to elucidate if there are differences in miRNA serum levels between FMC and healthy controls, if they followed the same patterns as in BC and, finally, if they were associated with clinicopathological features.
Serum samples from 45 female cats with FMC and 5 female healthy controls were used for the relative quantification of 5 microRNAs (miR-21, let-7a, miR-10b, miR-200b and miR-200c), which are consistently reported to be dysregulated in BC. Real-time polymerase chain reaction was performed and results were normalized to 2 reference genes (miR-191 and miR-484) by application of the 2-ΔΔCT method.
Circulating miR-200c and let-7a were significantly downregulated (p=0,045 and p=0,04, respectively) in cats with mammary carcinoma, comparatively to healthy cats. Moreover, let-7a levels were significantly associated with overall-survival (p=0,04), histological subtypes (p=0,04) and an inverse correlation was found with serum stromal derived factor-1 (SDF-1) levels (p=0,03; Spearman r=-0,34). Regarding miR-21, high serum levels were significantly associated (p=0,02) with shorter disease-free survival (DFS) and lymph node metastasis (p=0,01), whereas for miR-10b, higher levels were associated to a positive SDF-1 status (p=0,01). Furthermore, higher serum miR-200b levels were significantly associated with shorter DFS (p=0,02), necrosis (p=0,02), histological (p=0,0078) and molecular subtypes (p=0,04), and a positive correlation was found with the tumour size (p=0,04, Spearman r=0,31).
In conclusion, results suggest that miR-200c and let-7a are candidate diagnostic biomarkers for FMC, and let-7a, miR-21 and, particularly miR-200b, appear to have value as prognostic biomarkers. Moreover, miRNA patterns in FMC were similar to what is observed in BC, supporting that the first is a proper model in comparative oncology.
RESUMO - IDENTIFICAÇÃO DE MICRORNAS CIRCULANTES ENQUANTO BIOMARCADORES DE CARCINOMA MAMÁRIO FELINO - Os carcinomas mamários felinos (CMF) são muito agressivos e, mesmo após mastectomia total, são geralmente fatais devido a metastatização. Desta forma, meios de diagnóstico que permitam uma deteção mais precoce e opções terapêuticas mais eficazes são urgentes. Os microRNAs (miRNAs) regulam a expressão génica e encontram-se alterados em vários tipos de cancro, incluindo no cancro da mama humano (CMH). Até à data, não existem estudos sobre miRNAs em cancros felinos, pelo que este projeto teve como objetivos avaliar as diferenças nos níveis séricos de miRNAs entre gatas com carcinoma mamário e saudáveis, se estas seguiam o mesmo padrão que no CMH e se existiam associações com características clínico-patológicas. Soros de 45 gatas com CMF e de 5 saudáveis foram usados para a quantificação relativa de 5 miRNAs (miR-21, let-7a, miR-10b, miR-200b e miR-200c), os quais são consistentemente encontrados desregulados no CMH. Foi realizado PCR em tempo real e os resultados foram normalizados com 2 genes referência (miR-191 e miR-484), por aplicação do método 2-ΔΔCT. O miR-200c e o let-7a mostraram-se significativamente diminuídos (p=0,045 e p=0,04, respetivamente) nos soros de gatos com CMF, comparativamente aos saudáveis. Adicionalmente, os níveis de let-7a mostraram associações significativas com o tempo de sobrevivência (p=0,04), subtipos histológicos (p=0,04) e uma correlação inversa com os níveis séricos de stromal derived factor-1 (SDF-1) (p=0,03; Spearman r=-0,34). Relativamente ao miR-21, níveis maiores estavam significativamente associados a menor tempo livre de doença (p=0,02) e à presença de metástases nos linfonodos (p=0,01), enquanto para o miR-10b, mostraram associação com positividade para o SDF-1 (p=0,01). Além disso, níveis superiores de miR-200b apresentaram associações significativas com menores períodos de remissão (p=0,02), com a presença de necrose (p=0,02), subtipos histológicos (p=0,0078) e moleculares (p=0,04) e uma correlação positiva com o tamanho do tumor (p=0,04, Spearman r=0,31). Em conclusão, os resultados sugerem que o miR-200c e o let-7a são candidatos a biomarcadores de diagnóstico de CMF e que os níveis séricos de let-7a, miR-21 e, particularmente de miR-200b, poderão ter valor enquanto biomarcadores de prognóstico. Por fim, o padrão de desregulação dos miRNAs nos CMF foi semelhante ao CMH, apoiando o primeiro como um modelo válido em oncologia comparada.
RESUMO - IDENTIFICAÇÃO DE MICRORNAS CIRCULANTES ENQUANTO BIOMARCADORES DE CARCINOMA MAMÁRIO FELINO - Os carcinomas mamários felinos (CMF) são muito agressivos e, mesmo após mastectomia total, são geralmente fatais devido a metastatização. Desta forma, meios de diagnóstico que permitam uma deteção mais precoce e opções terapêuticas mais eficazes são urgentes. Os microRNAs (miRNAs) regulam a expressão génica e encontram-se alterados em vários tipos de cancro, incluindo no cancro da mama humano (CMH). Até à data, não existem estudos sobre miRNAs em cancros felinos, pelo que este projeto teve como objetivos avaliar as diferenças nos níveis séricos de miRNAs entre gatas com carcinoma mamário e saudáveis, se estas seguiam o mesmo padrão que no CMH e se existiam associações com características clínico-patológicas. Soros de 45 gatas com CMF e de 5 saudáveis foram usados para a quantificação relativa de 5 miRNAs (miR-21, let-7a, miR-10b, miR-200b e miR-200c), os quais são consistentemente encontrados desregulados no CMH. Foi realizado PCR em tempo real e os resultados foram normalizados com 2 genes referência (miR-191 e miR-484), por aplicação do método 2-ΔΔCT. O miR-200c e o let-7a mostraram-se significativamente diminuídos (p=0,045 e p=0,04, respetivamente) nos soros de gatos com CMF, comparativamente aos saudáveis. Adicionalmente, os níveis de let-7a mostraram associações significativas com o tempo de sobrevivência (p=0,04), subtipos histológicos (p=0,04) e uma correlação inversa com os níveis séricos de stromal derived factor-1 (SDF-1) (p=0,03; Spearman r=-0,34). Relativamente ao miR-21, níveis maiores estavam significativamente associados a menor tempo livre de doença (p=0,02) e à presença de metástases nos linfonodos (p=0,01), enquanto para o miR-10b, mostraram associação com positividade para o SDF-1 (p=0,01). Além disso, níveis superiores de miR-200b apresentaram associações significativas com menores períodos de remissão (p=0,02), com a presença de necrose (p=0,02), subtipos histológicos (p=0,0078) e moleculares (p=0,04) e uma correlação positiva com o tamanho do tumor (p=0,04, Spearman r=0,31). Em conclusão, os resultados sugerem que o miR-200c e o let-7a são candidatos a biomarcadores de diagnóstico de CMF e que os níveis séricos de let-7a, miR-21 e, particularmente de miR-200b, poderão ter valor enquanto biomarcadores de prognóstico. Por fim, o padrão de desregulação dos miRNAs nos CMF foi semelhante ao CMH, apoiando o primeiro como um modelo válido em oncologia comparada.
Description
Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária
Keywords
Feline mammary carcinoma microRNAs biomarkers serum comparative oncology carcinomas mamários felinos biomarcadores soro oncologia comparada
Pedagogical Context
Citation
Santos, A.R.G.N.S. (2018). Identification of circulating microRNAs as biomarkers of feline mammary carcinoma. Dissertação de mestrado. Universidade de Lisboa, Faculdade de Medicina Veterinária, Lisboa.
Publisher
Universidade de Lisboa, Faculdade de Medicina Veterinária