Publicação
Otimização de separação de ácidos biliares por HPLC acoplada a MS/MS
| datacite.subject.fos | Ciências Médicas::Ciências da Saúde | pt_PT |
| dc.contributor.advisor | Ferreira, Humberto Eduardo de Carvalho Santos | |
| dc.contributor.author | Fernandes, Maria Beatriz Forja Paz Pedro | |
| dc.date.accessioned | 2024-04-09T13:51:09Z | |
| dc.date.available | 2024-04-09T13:51:09Z | |
| dc.date.issued | 2023-09-21 | |
| dc.date.submitted | 2023-09-04 | |
| dc.description | Trabalho Final de Mestrado Integrado, Ciências Farmacêuticas, 2023, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia. | pt_PT |
| dc.description.abstract | Os ácidos biliares (AB) são compostos essenciais para vários processos fisiológicos e são produtos derivados do colesterol, após a metabolização hepática, que originam AB livres e AB conjugados, como é o caso dos glicoconjugados e tauroconjugados. Alguns dos processos biológicos em que os AB estão envolvidos são a homeostasia lipídica, sinalização celular e regulação dos níveis de glicémia. Adicionalmente, são cada vez mais importantes para o diagnóstico e prognóstico de complicações associadas a transplantes hepáticos. Usando como referência o trabalho anteriormente realizado pelo Professor Doutor Humberto E. Ferreira no âmbito dos AB, estudou-se a separação dos AB conjugados com taurina e glicina, por HPLC-MS/MS, com a utilização de uma mistura de solventes de fase móvel básicos, com uma fase orgânica (isopropanol e acetonitrilo) e uma fase aquosa (acetato de amónio e água), de forma a potenciar a ionização das moléculas em eletrospray, o que consequentemente aumenta o sinal registado pelo MS/MS. Para além disso, a ordem de eluição dos AB conjugados passa a ser ditada pelo número de grupos hidroxilo que o AB possuir. Através do software JMP, foi feita a otimização da composição da fase móvel, tendo por base Response Surface Models (RSM), que se baseiam em equações quadráticas a quatro incógnitas (cada uma respetiva a um componente do solvente), de forma a determinar a melhor composição da fase móvel, que garanta uma boa separação e eluição dos AB. O JMP permite ainda realizar Design Of Experiments (DoE) com recurso ao I-optimal design, de forma a minimizar o número de experiências necessárias à otimização da fase móvel. Baseando-se no trabalho previamente realizado, foi estudada uma nova composição da fase móvel, aplicadas a uma nova coluna C18 fase reversa, que contém os vários solventes em estudo e que permite otimizar o processo de eluição e separação dos AB, nomeadamente ao avaliar a diferença dos tempos de retenção de compostos di-hidroxilados que contenham o mesmo tipo de molécula conjugada. A otimização da fase móvel permite uma maior tolerância a alterações durante a eluição, sem comprometer a separação dos compostos, o que contribui para a robustez do método. | pt_PT |
| dc.description.abstract | Bile acids (BA) are essential compounds for several physiological functions, and byproduct of cholesterol, after hepatic metabolization. There are at least two types of BA: free BA and conjugated BA, such as the glycoconjugates and the tauroconjugates. Some of the physiological roles that BA perform are lipid homeostasis, cellular signaling and glycemic regulation. In addition to their metabolic role, BA have become a powerful tool regarding diagnosis and prognosis in liver transplanted patients. Using the work previously done by PhD Professor Humberto E. Ferreira in regards to BA as reference, namely the BA conjugated with taurine and glycine, their separation has been studied using HPLC-MS/MS and a mobile phase using basic solvents, which consists of a mixture of an organic phase (isopropanol, acetonitrile) and an organic phase (ammonium acetate and water), in order to increase the BA ionization, by means of electrospray, which in turn increases the signal captured by MS/MS. In addition, the order in which the BA are eluted is dictated by the number of hydroxyl groups in the molecules. By using JMP software, we were able to optimize the mobile phase, while using Response Surface Models (RSM), which use quadratic equations with four variables (one variable per solvent), in order to determine the best mobile phase for the separation and elution of the BA. In addition, JMP allows for a Design of Experiments (DoE), using I-optimal design, which decreases the number of experiments necessary to optimize the mobile phase. Based on previous work, we studied a new mobile phase, by resorting to a new C18 column and using a mixture of the different solvents previously used, not only to determine a new mobile phase that allows a better separation and elution of BA, but also to analyze outcome variables, such as the difference between the retention times of di-hydroxyl BA that have the same conjugated molecule. This new mobile phase allows for a more robust technique, without compromising the separation of the molecules. | pt_PT |
| dc.identifier.tid | 203513185 | pt_PT |
| dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/10451/64066 | |
| dc.language.iso | por | pt_PT |
| dc.subject | Ácidos e sais biliares | pt_PT |
| dc.subject | HPLC-MS/MS | pt_PT |
| dc.subject | RSM | pt_PT |
| dc.subject | I-Optimal Design | pt_PT |
| dc.subject | DoE | pt_PT |
| dc.subject | Mestrado Integrado - 2023 | pt_PT |
| dc.title | Otimização de separação de ácidos biliares por HPLC acoplada a MS/MS | pt_PT |
| dc.type | master thesis | |
| dspace.entity.type | Publication | |
| rcaap.rights | openAccess | pt_PT |
| rcaap.type | masterThesis | pt_PT |
| thesis.degree.name | Mestrado Integrado em Ciências Farmacêuticas | pt_PT |