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- Súmula vinculante : uma abordagem histórico-jurídicaPublication . Nascimento, Erick Venâncio Lima do; Graes, IsabelO presente trabalho tem como objetivo principal uma análise histórico-jurídica do instituto da jurisprudência sob a perspectiva da utilização no Brasil e em Portugal de precedentes judiciais vinculantes. Nesse propósito, busca-se uma análise do que foi a jurisprudência quando no nascimento desse instituto, ainda sob a forma de formulação doutrinária, passando pelo período medieval com a utilização de façanhas, até chegar à implementação dos assentos em Portugal, posteriormente “emprestados” ao sistema judicial brasileiro. A partir disso, verificaremos o nascimento de uma identidade jurídica brasileira, passando pela Independência do Brasil e pela Constituição Imperial de 1824, para, analisando a evolução do sistema judicial, chegarmos à formação de uma cultura jurídica que busca, no campo de um Poder Judiciário consolidado, a pacificação dos conflitos e a contenção da escalada litigiosa por meio da utilização de institutos que, ainda que com nova denominação, possuem origem e características trazidas da história jurídica portuguesa, notadamente os assentos. Serão apresentados os impactos da súmula vinculante como fenômeno de uma cultura jurídica do common law emprestada ao civil law, bem como os perigos da utilização desse instituto no que diz respeito à invasão na atividade legislativa e na livre convicção do juiz natural, sempre cotejando-os com os princípios da igualdade e da segurança jurídica.
- Integração fiscal e as relações comerciais transnacionais : a conciliação do comércio e da fiscalidadePublication . Peixoto, João Marcelo; Mota, Pedro Infante, 1968-Essa dissertação parte da premissa de que as assimetrias tributárias internacionais decorrentes da concorrência fiscal prejudicial é um fenômeno global que demanda continuado enfrentamento, por gerar abuso de poder econômico e por atentar contra a livre concorrência, com severas consequências nas relações comerciais, sejam elas multilaterais e regionais. A OMC, a OCDE e a União Europeia desenvolveram importantes instrumentos de governança fiscal. Contudo, a produção normativa soft law trazida pelo Projeto BEPS e as hard law da OMC estão a ser confrontadas em alguns pontos que demandam a internacionalização das iniciativas das reformas tributárias, tais como a necessidade de maior clareza conceitual do que vem a ser «planejamento tributário agressivo», do escopo tímido das regras multilaterais propostas e do aprimoramento dogmático da soberania fiscal. Paralela às ações transnacionais de contenção e resolução da arbitragem fiscal internacional, percebe-se uma reconfiguração do multilateralismo econômico, que, ao longo das recentes décadas, parece experimentar uma inflexão nas estratégias de negociação diante do expressivo aumento dos acordos regionais comerciais que passaram a estruturar seus sistemas próprios de solução de controvérsias. Nesse contexto, esse trabalho propõe-se a analisar como se apresentam alguns dos caminhos regulatórios das demandas de ordem fiscal no comércio e investimento internacionais diante de um presente cenário de fragmentação do direito internacional, nomeadamente vislumbrada, por exemplo, na crescente sobreposição de competências e de jurisprudências delineadas nos tratados regionais comerciais [RTA’s] acerca da composição de conflitos ou na dinamização da tributação regional dos serviços digitais [DST´s] e se, dentro desse cenário, como consolidar a governação fiscal global diante das relações comerciais internacionais contemporãneas, tendo como referência as regras do GATT/OMC e a intersecção destas com algumas das propostas trazidas pelo Projeto BEPS.
- STEM na aprendizagem da energia e movimentos – Um trabalho com alunos do 10º anoPublication . Barbosa, Luís Daniel Venturinha; Baptista, Mónica Luísa Mendes, 1980-; Agostinho, Rui Jorge, 1958-O presente trabalho tem como objetivo conhecer como a implementação de atividades STEM influencia a aprendizagem dos alunos sobre o tópico energia e movimentos e a sua contribuição para o desenvolvimento das competências preconizadas no programa da disciplina de Física e Química A do 10.º ano de escolaridade. Neste sentido, procura-se identificar que dificuldades revelam os alunos, que aprendizagens realizam e que avaliações fazem relativamente ao uso deste tipo de tarefas. Este trabalho insere-se no quadro de projeto mais amplo “Let’s GoSTEM: Abordagem STEM e sua influência nas aprendizagens de Física, interesse e motivação”, financiado pela FCT, referência PTDC/CED-EDG/31480/2017. Para atingir as finalidades apresentadas optou-se por utilizar uma metodologia de investigação qualitativa, uma vez que, se pretende conhecer e descrever as reações dos alunos, em ambiente de sala de aula, ao serem implementadas tarefas de cariz STEM. Os dados são recolhidos utilizando vários instrumentos, nomeadamente, a observação participante, os questionários e os documentos escritos. Da análise de conteúdo emergiram categorias e subcategorias do estudo que facilitaram a apresentação, interpretação e compreensão dos dados recolhidos. Os resultados apontam para uma maior motivação e um maior envolvimento por parte dos alunos quando envolvidos nas tarefas STEM propostas. De facto, os dados mostram que, partindo de um contexto real e próximo do seu quotidiano, os alunos realizam aprendizagens mais significativas sobre o tópico energia e movimentos. De acordo com os dados recolhidos, os alunos realizaram aprendizagens no domínio conceptual e no domínio processual.
- Avaliação do comportamento de predação de Dicyphus cerastii Wagner (Hemiptera: Miridae): ritmo circadiano, necrofagia e preferências de presasPublication . Rodrigues, Guilherme Bulteau Carneiro; Oliveira, Elisabete Tavares Lacerda de FigueiredoO conhecimento que se foi adquirindo da complexidade do meio natural e interacções entre os vários seres vivos tem-se revelado de extrema importância para a compreensão da contribuição de cada espécie animal nos ecossistemas agrários. Os métodos alternativos de gestão de inimigos das culturas têm apresentado importância crescente, devido aos efeitos de toxicidade dos produtos fitofarmacêuticos que são actualmente utilizados, não só devido à sua toxicidade, progressiva ineficácia por desenvolvimento de resistências e às restrições impostas no uso de pesticidas. Os mirídeos zoofitófagos são insectos polífagos que ocorrem naturalmente em diversas culturas e cuja plasticidade lhes permite sobreviver em condições de escassez de presas, conferindo estabilidade às populações. Dicyphus cerastii e Nesidiocoris tenuis são duas dessas espécies: N. tenuis é largamente comercializado como agente de protecção biológica; D. cerastii é um potencial candidato a protecção biológica de conservação, nomeadamente em tomateiro. Esta dissertação teve como objectivos avaliar: o ritmo circadiano de predação de D. cerastii e N. tenuis, usando ovos de Ephestia kuehniella, sob condições de luz ou sua ausência; a aptidão para a necrofagia, usando como presa o afídeo Myzus persicae e contabilizando o número de afídeos vivos e mortos predados; a preferência de predação entre quatro espécies praga, ninfas de M. persicae, Bemisia tabaci e Planococcus citri e ovos de Tuta absoluta. N. tenuis e D. cerastii mostraram elevada actividade de predação nocturna e diurna e D. cerastii foi um predador mais activo durante o dia do que N. tenuis tanto de dia como de noite. D. cerastii consumiu mais afídeos mortos apontando para uma preferência pela necrofagia. Mostrou preferência por M. persicae, B. tabaci e T. absoluta, com consumos semelhantes para as três espécies e significativamente menor consumo de P. citri. As secreções de P. citri pareceram desencorajar D. cerastii de predar esta espécie.
- A relevância da comunicação em situações de crise e pós-crise junto das comunidades locais em desastres ambientais com origem industrial. Os casos dos rompimentos de barragens em Mariana (2015) e Brumadinho (2019) no Brasil.Publication . Teixeira, Clésio Admar; Sónia Margarida Pedro SebastiãoEsta tese de doutoramento investiga a relevância da comunicação em situações de crises e nos pós-crises junto das comunidades locais, em desastres ambientais não naturais, com origem industrial. Através de uma abordagem metodológica mista (qualitativa e quantitativa), com estudo de caso múltiplo, relacionados aos maiores desastres industriais registrados no Brasil, a partir dos rompimentos das barragens de rejeitos de minério em Mariana (2015) e Brumadinho (2019) e que provocaram enormes danos ambientais, sociais e econômicos e cerca de 300 mortes. Por meio das análises de discurso e de conteúdo foram categorizadas mais de seis mil publicações feitas pelas organizações envolvidas nos referidos desastres (Samarco, Vale, Fundação Renova, Semad e ANM) nos websites, redes sociais online e nos órgãos tradicionais de comunicação próprios (rádio e jornais impressos), entre novembro de 2015 e abril de 2021, além de seus enquadramentos nas estratégias de respostas às crises e no discurso da renovação, no pós-crises. Esta tese se distingue da maioria das investigações em comunicação de crise ao dar voz à população, por meio da aplicação de 1.741 inquéritos por questionário aos moradores de dez dos municípios impactados pelos desastres. Concluiu-se pelo protagonismo da dependência econômica das comunidades envolvidas no apoio às mineradoras; baixa relevância da comunicação das organizações com as comunidades locais; elevado nível de desconfiança por parte dos inquiridos com relação às informações disseminadas pelas indústrias; e, a incidência do efeito halo, a reputação anterior às crises, na desresponsabilização das organizações apontadas como culpadas pelos desastres. A investigação expressa, entre os contributos, a necessidade de as organizações realizarem auditorias em seus investimentos e ações de comunicação para a elaboração de estratégias e planos de comunicação que lhes permitam superar os momentos de turbulência das crises, aprender com elas e projetar suas ações para o futuro.
- A influência do sistema de gestão de carreira na retenção dos trabalhadores: Um estudo de caso numa empresa de TIPublication . Pereira, Cristiana Maia; Carlos Demony BotelhoEste estudo pretende investigar a natureza da gestão de carreira nos profissionais de tecnologias de informação, procurando compreender de que forma o sistema de práticas de gestão de carreira é relevante para a retenção desses profissionais. Esta problemática revela-se pertinente no contexto competitivo atual onde o conceito de carreira se mostra em profunda transformação e constituindo um dos principais desafios para a gestão dos recursos humanos e do talento. Em termos de abordagem metodológica trata-se de um estudo de caso, realizado numa empresa do setor das tecnologias de informação, procedendo-se à recolha de dados através da análise qualitativa de uma fonte primária com entrevistas semiestruturadas e de uma fonte secundária através de análise documental. Os resultados do estudo evidenciam que o sistema de gestão de carreira é relevante para a retenção dos trabalhadores, sendo um dos principais fatores de decisão apontados para que os trabalhadores queiram permanecer na empresa. O desafio das organizações é procurar desenhar um sistema de gestão de carreira que consiga equilibrar os objetivos da própria organização e dos seus trabalhadores. O estudo contribuiu para a literatura de duas formas. Primeiro, abordando um tema que está na agenda da gestão de recursos humanos e que representa um dos principais desafios para as empresas, como é o caso da retenção dos trabalhadores, associando-o ao sistema de gestão de carreira. Segundo, recorrendo ao modelo AMO para interpretar a política de gestão de carreira nas empresas. As implicações para a teoria e práticas de gestão foram discutidas e apresentadas linhas futuras de investigação.
- Violent intimate relationships of Brazilian women in PortugalPublication . Silva, Estefânia; Mendes, Mafalda; Neves, Sofia; Topa, JoanaThis study aims to understand the intimate experiences of immigrant Brazilian women living in Portugal, and also to characterize possible victimization experiences in their intimate relationships. The empirical base was constituted by 114 immigrant women, and the results show that the intimate experiences of these women are marked by violence episodes both in Portugal and in Brazil. The most frequent types of violence were psychological and verbal violence, with these practices occurring more than once in their intimate relationships. When experiencing violence episodes, these women do not seek help and do not file a formal complaint, which legitimizes and reinforces the victimization to which they are subjected. This study intends to contribute to the development of action strategies that lead to the real protection of immigrant victims and to challenge the greater risk that immigration can entail in the lives of immigrant women, especially for victims of intimate violence.
- Development of cellulose-based sustainable and smart food packaging filmsPublication . Romão, Sofia Isabel Jacinto; Silva, Isabel Alexandra Caldeira Ribeiro Monge da; Bettencourt, Ana Francisca de Campos SimãoAs embalagens desempenham um papel importante no que diz respeito à qualidade e segurança dos alimentos, especialmente para reduzir o seu desperdício e deterioração. A principal desvantagem é que a indústria das embalagens é uma das que mais utiliza plástico. O uso de plástico tem recebido especial atenção devido ao seu consumo excessivo e impactos ambientais que acarreta. Assim, novas alternativas às embalagens plásticas convencionais têm sido desenvolvidas como, por exemplo, embalagens à base de biopolímeros. As embalagens ativas e inteligentes capazes de incorporar agentes antimicrobianos e antioxidantes, e também indicadores de qualidade, têm emergido como novas abordagens, de forma a melhorar as propriedades das embalagens e prolongar a vida útil dos alimentos. Nos últimos anos, os frutos vermelhos têm sido destacados pelo seu elevado conteúdo em compostos bioativos. O arando, especificamente, tem sido associado a vários benefícios para a saúde humana tais como prevenção de infeções do trato urinário, de danos oxidativos, de doenças cardiovasculares e ainda inflamações. Assim, o principal objetivo deste trabalho foi desenvolver um filme à base de acetato de celulose com extratos de arando, destinados à aplicação de embalagens alimentares, e estudar as suas propriedades antimicrobianas, antioxidantes e antibiofilme, bem como a sua sensibilidade a alterações de pH. Desta forma, o trabalho foi dividido em três partes fundamentais: i) extração de compostos bioativos e a sua caracterização; ii) desenvolvimento de filmes biodegradáveis à base de celulose e a sua caracterização; iii) funcionalização dos filmes de celulose com a incorporação dos extratos de arando. O estudo começou pela determinação do conteúdo total em compostos fenólicos, da capacidade antioxidante (método de sequestro de radicais livres DPPH), das propriedades antimicrobianas (Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Inibitória Mínima de Biofilme (CIMB)) e da sensibilidade a variações de pH dos extratos de arando provenientes de duas fontes diferentes, arando em pó e arando fresco. Em seguida, os filmes à base de celulose foram desenvolvidos, otimizados e caracterizados através de diversas análises, tais como avaliação do grau de molhabilidade, análise da superfície por microscopia eletrónica de varrimento, avaliação das propriedades de barreira à luz, avaliação dos espetros dos filmes por espectroscopia no infravermelho e determinação da permeabilidade ao vapor de água. Após a incorporação dos extratos de arando, as propriedades antimicrobianas dos filmes foram testadas através de ensaios como o método de difusão em agar e avaliação da viabilidade celular pelo método da resazurina, e as propriedades antibiofilme foram avaliadas através da observação de imagens ao microscópio eletrónico de varrimento. Os resultados mostraram que os dois extratos de arando apresentaram propriedades antioxidantes. O conteúdo fenólico total dos extratos variou de 49.9 ± 1.9 a 226.5 ± 22.5 mg Ácido Gálico eq/ g de extrato de arando, sendo que o extrato de arando em pó apresentou o valor mais elevado. Através do método de sequestro de radicais DPPH, o extrato de arando em pó apresentou a maior capacidade de sequestrar radicais livres, exibindo a maior atividade antioxidante. Os extratos também apresentaram capacidade antimicrobiana contra Staphylococcus aureus ATCC 25923 e Enterococcus faecalis NCTC 12697. Ambos os extratos apresentaram atividade contra S. aureus com uma CIM de 3,1 mg/mL, no entanto, o extrato de arando fresco foi o que apresentou maior atividade contra E. faecalis com uma CIM de 1,6 mg/mL, enquanto o extrato em pó apresentou uma CIM de 3,1 mg/mL. Após expor os extratos de arando a diferentes pH, verificou-se o seu potencial como um corante inteligente. Assim, os extratos de arando fresco e em pó foram considerados adequados para a incorporação em filmes. Para a preparação dos filmes, filmes de acetato de celulose (CA) foram desenvolvidos com a adição do plastificante glicerol (GLY). Após a otimização dos filmes, a formulação selecionada foi CA 5% (m/V) com GLY 1% (m/V). Os extratos de arando foram adicionados em três diferentes concentrações (25, 50 e 75 mg/mL), e apresentaram uma tonalidade vermelha, que diferiu entre os extratos e com o aumento da sua concentração. Quanto ao parâmetro espessura, nem a adição de glicerol nem a adição dos extratos influenciou a espessura dos filmes. Por outro lado, a hidrofobicidade dos filmes, avaliada através do ângulo de contacto entre a gota de água e a superfície do filme, foi influenciada pela adição de glicerol e dos extratos. Ambos fizeram com que os filmes se tornassem mais hidrofílicos. Quanto às propriedades de barreira à luz, os filmes incorporados com extratos tornaram-se mais opacos, diminuindo a transmissão da luz, e permitindo assim a proteção dos alimentos contra certos fatores como a oxidação e alterações de sabor, cor ou valores nutritivos. Em relação à atividade responsiva ao pH, os filmes mudaram de cor sob diferentes valores de pH, demonstrando a sua atividade inteligente. Através da avaliação das propriedades mecânicas, os resultados obtidos mostraram que após a incorporação dos extratos de arando, a rigidez dos filmes diminuiu (7.0 ± 0.00 para 2.0 ± 0.00 Pa), tornando-os mais flexíveis. A atividade antimicrobiana dos filmes incorporados com extratos foi avaliada para verificar se as propriedades dos extratos se mantinham aquando da sua incorporação nos filmes. Os resultados dos diâmetros dos halos de inibição demonstraram que todos os filmes com extratos inibiram o crescimento da bactéria S. aureus quando comparados com os filmes sem extrato, promovendo halos de 5.52 ± 0.28 a 6.73 ± 0.39 mm. No entanto, contra a bactéria E. faecalis, apenas os filmes com a concentração mais elevada de extrato (75 mg/mL) apresentaram um efeito inibitório. A partir dos ensaios da viabilidade celular e da observação das imagens ao microscópio eletrónico de varrimento, foi também possível verificar que os filmes com 75 mg/mL de extratos apresentaram maior redução na formação de biofilme pelas bactérias referidas. Deste modo, os filmes incorporados com 75 mg/mL de extrato de arando fresco ou em pó foram considerados os mais adequados para o desenvolvimento dos filmes. O conteúdo fenólico dos filmes selecionados foi testado, sendo que os filmes com extrato de arando em pó apresentaram maior conteúdo fenólico (160.4 ± 30.3 mg GA eq/g extrato) do que os filmes com extrato de arando fresco (19.2 ± 8.1 mg GA eq/g extrato), o que provou que a produção dos filmes não comprometeu a presença dos compostos antioxidantes. Foi também demonstrado que a incorporação dos extratos de arando não influenciou a permeabilidade ao vapor de água destes filmes. De um modo geral, os resultados apresentados neste estudo revelam o potencial do desenvolvimento de filmes de extrato de arando com propriedades antimicrobianas, antioxidantes e antibiofilme, e ainda a sua capacidade de mudar de cor a diferentes pH. Desta forma, os resultados apontam para uma possível aplicação em embalagens alimentares ativas e inteligentes. O desenvolvimento destas embalagens é cada vez mais importante na indústria alimentar, para assegurar a qualidade do produto e a segurança do consumidor, prevenindo a contaminação dos produtos através da redução e inibição do crescimento de microrganismos, e informando o consumidor acerca das condições ambientais do produto embalado. Mais estudos devem ser realizados para o aperfeiçoamento das propriedades dos filmes, nomeadamente a melhoria das propriedades mecânicas e reforço da atividade antimicrobiana através da combinação com outros compostos antimicrobianos. Novos estudos devem igualmente ser feitos relativamente ao comportamento destes filmes no contacto direto com produtos alimentares.
- Restoring cholesterol homeostasis in neurons by cyp46a1 does not stall the progression of niemann-pick type C diseasePublication . Reis, Joana Pinheiro Leite da Anunciação; Nunes, Maria João de Jesus; Rodrigues, Elsa Margarida TeixeiraA enzima colesterol 24-hidroxilase (CYP46A1) consiste num citocromo P450 neuro-específico, que catalisa a conversão do colesterol em 24S-hydroxycholesterol, constituindo a principal via de eliminação do colesterol no encéfalo. Tem assim um papel crucial na manutenção do normal metabolismo do colesterol, tendo em conta que o encéfalo é o órgão do corpo humano com maior teor de colesterol. Em estudos prévios do nosso grupo, em que foram utilizados diferentes modelos celulares da doença de Niemann-Pick type C (NPC), o CYP46A1 foi sugerido como um potencial alvo terapêutico nesta patologia. Isto deve-se à capacidade do CYP46A1 em corrigir a acumulação de colesterol não-esterificado nos endossomas tardios /lisossomas (LE/L), que constitui a principal característica da doença de NPC. Este fenótipo é originado por mutação na proteína NPC1, localizada na membrana dos LE/L, e responsável pelo efluxo e reciclagem do colesterol internalizado sob a forma de lipoproteínas. A doença de NPC é uma doença rara, com alternativas terapêuticas muito limitadas. A sintomatologia que a caracteriza é diversa e afeta o encéfalo, fígado e o baço. Na maioria dos casos, a doença manifesta-se durante a infância ou início da adolescência, sendo que os pacientes apresentam um comprometimento progressivo da função motora e intelectual, que geralmente levam à morte nas duas primeiras décadas de vida. Entre as alterações patológicas neuro-viscerais, um sintoma principal da doença de NPC é a ataxia cerebelar, que é resultante da perda progressiva de células de Purkinje. O mecanismo responsável pela perda neuronal acentuada não se encontra ainda definido, porém, o desequilíbrio induzido pela acumulação de colesterol é frequentemente tido em conta como agravante, senão mesmo a causa da doença. De facto, a desregulação da homeostase do colesterol está subjacente ao processo neurodegenerativo, induzindo um bloqueio do fluxo autofágico e um aumento da neuro-inflamação. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar se a expressão do CYP46A1 promove a melhoria do fenótipo da doença, com foco nas principais características patológicas, incluindo a desregulação da homeostase do colesterol, neuro-inflamação e bloqueio da autofagia. Para isso, aumentámos os níveis de CYP46A1 utilizando vírus adeno-associados, num modelo murganho da doença de NPC. Estes animais, Npc1tm(I1061T), possuem o knock-in da mutação I1061T no gene que codifica para a proteína NPC1, que é a mais frequente encontrada nos humanos. Os nossos resultados mostraram que a expressão ectópica de CYP46A1 impediu parcialmente a perda de peso e a hepatomegalia observada os murganhos NPC. Além disso, o CYP46A1 promoveu uma correção significativa dos níveis de mRNA de genes envolvidos na síntese, captação, efluxo e esterificação do colesterol. A este efeito, foi também associada uma promoção da redistribuição do colesterol não esterificado acumulado nos LE/L, que foi sugerida através da análise por marcação de cortes parasagitais do córtex dos animais com filipina III. A partir destes resultados, foi possível concluir que as células do cerebelo e córtex dos animais NPC estão de facto a responder à normalização da homeostase do colesterol promovida pela expressão do CYP46A1. Outra característica impactante da doença de NPC é a neuro-inflamação, que é evidenciada pela ativação de microglia, que inicia uma cascata neurodegenerativa e leva à ativação de astrócitos. A expressão de CYP46A1 corrigiu parcialmente os níveis de mRNA aumentados de alguns marcadores de microglia característicos de um fenótipo mais pró-inflamatório no cerebelo dos murganhos NPC, e em simultâneo induziu um aumento dos níveis de expressão de Arginase 1 e do Fator de Transformação do crescimento β1. Esta alteração do perfil inflamatório da microglia foi corroborada por ensaios de imunohistoquímica, em que foram analisados os níveis da molécula adaptadora de ligação ao cálcio 1 (Iba-1), em várias regiões do cerebelo dos murganhos, nomeadamente o núcleo cerebelar profundo e as camadas molecular e granular dos lóbulos do cerebelo, e que sugerem uma diminuição da ativação da microglia por parte do CYP46A1. No entanto, não foi observada nenhuma melhoria relativamente ao perfil de ativação de astrócitos. Concomitante com a correção da homeostasia do colesterol, foi também registado um restabelecimento dos níveis de mRNA da enzima lisosomal Catepsina D o que sugere uma melhoria parcial da desregulação lisossomal caraterística da doença de NPC. Visto que a disfunção lisossomal está associada aos defeitos na autofagia verificados nesta doença, foram efetuados estudos in vitro recorrendo a células HeLa em que foi efetuado o knock-down da proteína NPC (NPC-KO). O aumento da expressão do CYP46A1 com recurso a transdução com vectores de adenovírus, confirmaram os resultados previamente obtidos pelo nosso grupo no modelo animal NPC, ao indicar que a expressão de CYP46A1 promove a restauração do fluxo autofágico. Este efeito foi observado através de uma redução na acumulação da forma lipidada da proteína 1 de cadeia leve 3 associada a microtúbulos (LC3-II), bem como através da análise dos níveis de mRNA de genes envolvidos na regulação da autofagia. Embora uma melhoria das várias características patológicas principais da doença de NPC tenha sido registada em resposta à expressão de CYP46A1, a degeneração das células de Purkinje não foi revertida no cerebelo dos murganhos NPC. Esta análise decorreu do cálculo da densidade de células de Purkinje após marcação dos tecidos com Violeta de Cresil e posterior confirmação através de marcação com um anticorpo anti-Calbindina através de imunofluorescência. Os resultados apresentados neste estudo demonstram que a correção da homeostase do colesterol mediada por CYP46A1 em murganhos NPC não é suficiente para prevenir a morte de células neuronais, realçando o papel de outros lípidos neurotóxicos na etiologia desta doença. No entanto, a expressão de CYP46A1 promoveu a reversão de importantes aspetos patológicos da doença, nomeadamente a normalização do metabolismo do colesterol, regularização do fluxo autofágico e diminuição da neuro-inflamação. Sendo estes aspetos característicos também de variadas outras doenças neurodegenerativas, o CYP46A1 poderá então representar uma abordagem terapêutica válida em diferentes contextos.
- Formulation and characterization of locust bean bum-based energy hydrogels supplemented with Chlorella vulgarisPublication . Almeida, Joana Gonçalves de; Silva, Isabel Alexandra Caldeira Ribeiro Monge da; Bettencourt, Ana Francisca de Campos SimãoNos últimos anos, as microalgas, nomeadamente a espécie Chlorella vulgaris têm ganho uma grande relevância devido ao seu alto teor em compostos bioativos assim como valor nutricional. As microalgas podem crescer sob um conjunto diversificado de condições ambientais e vários sistemas de crescimento têm sido utilizados para isolar e cultivar microalgas. As microalgas podem ser cultivadas em laboratório, ou ao ar livre, e em produção em pequena ou grande escala. Nos últimos anos, foram desenvolvidos vários produtos contendo microalgas em pó e biomassa, nomeadamente massas, emulsões, sobremesas gelificadas e bolachas. A riqueza de compostos bioativos nas microalgas pode contribuir para o desenvolvimento de uma indústria alimentar baseada em algas, focada na produção e utilização de microalgas para produtos alimentícios funcionais inovadores. Os géis energéticos têm vindo a ganhar relevância no mercado, devido a uma tendência crescente da população em aderir a um estilo de vida saudável e praticar exercício físico. Como resultado, o objetivo principal desta pesquisa foi criar hidrogéis energéticos suplementados com Chlorella vulgaris. Esta pesquisa foi dividida em duas partes, sendo uma focada no estágio realizado na empresa Allmicroalgae, abordando os processos de produção e controlo de qualidade das microalgas e a segunda parte sobre a otimização e caracterização destes hidrogéis, esta última focando-se numa avaliação de estabilidade, análise sensorial, avaliação nutricional e determinação da atividade antioxidante. A produção de géis energéticos ricos em nutrientes e eletrólitos requer um componente que conecta a água e forma um colóide chamado hidrocolóide. O hidrocoloide escolhido foi a goma de alfarroba (GA). A GA mostrou alta solubilidade, dispersibilidade, viscosidade e biocompatibilidade com as formulações de gel. Os resultados deste trabalho demostraram que à medida que a concentração de GA aumenta, sua viscosidade aumenta consequentemente. A GA em baixas taxas de cisalhamento apresenta um comportamento Newtoniano e, concluiu-se que uma concentração de 0,6% (p/v) de GA seria a melhor percentagem para as formulações em comparação com determinações de viscosidades de géis energéticos vendidos no mercado. A incorporação de microalgas em produtos alimentares enfrenta vários desafios principalmente devido às suas características organoléticas, incluindo forte cor, sabor e odor. Os atributos sensoriais dos alimentos estão diretamente ligados à aceitação do consumidor, de modo que estratégias alternativas para melhorar a qualidade organolética dos alimentos contendo microalgas incluem a extração dos compostos alvo com a remoção da clorofila. Esse foi o principal motivo da escolha da Honey Chlorella vulgaris em pó para as formulações em gel. Honey Chlorella vulgaris é uma estirpe otimizada e selecionada da Chlorella vulgaris que faz com que esta tenha um menor teor de clorofila. Tornando-se mais agradável para o consumo sendo assim possível adicionar uma quantidade maior e consequentemente aumentar o valor nutricional do produto. Assim, em primeiro lugar, foi escolhida uma formulação de 4% Honey Chlorella vulgaris, após provar a formulação foi decidido adicionar outra formulação com menor percentagem desta microalga (1.5% (p/v)) enquanto todos os outros componentes se mantiveram nas mesmas quantidades. O Carboidrato escolhido foi a maltodextrina que é um carboidrato complexo de fácil absorção, com pouco sabor. É muito popular entre os atletas porque é rapidamente absorvido pelo intestino, repondo os níveis de açúcar no sangue e proporcionando um boost de energia quase instantâneo. Os resultados da avaliação da estabilidade mostraram que os géis mantidos em temperatura ambiente na segunda semana ganharam um odor atípico e apresentaram contaminação bacteriana nos ensaios microbiológicos, indicando que já não se encontravam aptos para consumo. Com estes resultados percebeu-se que era mais benéfico para a conservação do produto adicionar um agente conservante à sua formulação final de forma a prolongara a sua vida útil. Após a avaliação da estabilidade as formulações finais foram estabelecidas, sendo constituídas por 0,6% de goma de alfarroba (hidrocolóide), 50% de maltodextrina (carbohidrato), 0,1% de sorbato de potássio (conservante), 0,2% de NaCl (fonte de eletrólitos), 0,25% de ácido cítrico (controlo de pH) e sabor de limão para disfarçar o sabor das microalgas. Com estas percentagens estabelecidas e para estudar o efeito que a Honey C. vulgaris teve no produto, foram criadas duas formulações, a primeira com 4 % de Honey C. vulgaris, a pensar no valor nutricional do produto, e a segunda com 1,5 % desta microalga, para um sabor mais subtil a pensar na aceitabilidade do sabor pelos consumidores. Em relação à análise sensorial, os participantes avaliaram as formulações até 6, sendo 1-nada agradável e 6- excelente, foram avaliadas as formulações finais e comparadas com um gel energético do mercado. As pontuações das duas formulações (1-6) em relação ao seu cheiro foram de 4 (1.5% HC) e de 3,30 (4% HC), devido ao aroma de limão adicionado, e pontuação foi maior no gel do mercado testado. Em relação à textura, as pontuações variaram entre 3,95 (4% HC) e 4,70 (gel comercial). As pontuações do sabor foram as que mais variaram, sendo que, em relação à formulação 4% HC o resultado foi negativo (2,85) e o a do gel comercial 4,10. Dos três géis avaliados os participantes preferiram o gel do mercado, contudo os resultados foram positivos para a formulação com menor percentagem de microalga (1,5% HC). Em relação há avaliação nutricional, a percentagem média de matéria seca foi de 51,1 ± 0,1% em 1,5% HC e em 4% HC foi de 52,4 ± 0,1%. Em relação às proteínas, a percentagem média de proteína variou de 0,6 ± 0,0 % (1,5% HC) e 1,4 ± 0,0 % (4% HC). A percentagem média de açúcares foi de 50,8 ± 1,84% em 1,5% HC e 56,5 ± 0,7 em 4% HC. Em relação ao teor de lipídios o método não teve sensibilidade suficiente para medir quantidades tão pequenas. Os resultados da avaliação nutricional foram os esperados de acordo com o rótulo dos componentes adicionados e mostraram que a adição das microalgas melhorou o conteúdo nutricional do produto, sendo que a formulação de 4% HC possuiu maior valor nutricional. Comparando estes resultados com os dos rótulos dos géis energéticos do mercado, conclui-se que o conteúdo nutricional de ambas as formulações se encaixa na categoria de géis energéticos para desportistas, garantindo uma formulação adequada para os atletas. Em relação à atividade antioxidante os resultados mostraram atividade de inibição do radical DPPH no extrato de Honey Chlorella vulgaris em diferentes concentrações. Para uma atividade de eliminação de 50%, a concentração de extratos do extrato foi de 2,437 mg/mL. O método DPPH não foi compatível com as amostras devido aos altos níveis de açúcar que precipitaram com a adição de metanol. Conseguimos concluir que ao aumentar a percentagem da microalga o produto tornou-se menos apelativo para o consumidor. Contudo deve-se ter em conta que suplementos para desportistas normalmente tem um paladar pouco apelativo, e quem pratica desporto, consume estes produtos não pelo seu sabor, mas principalmente pelo seu efeito benéfico no organismo. Conclui-se também que os géis energéticos enriquecidos com Honey Chlorella vulgaris podem ser considerados como uma forma alternativa de incluir esta microalga promotora de saúde em suplementos para desportistas. No entanto, é necessário melhorar os desenvolvimentos tecnológicos que possibilitem o aumento dos níveis de incorporação e o desenvolvimento de outros alimentos enriquecidos com esta espécie de microalga. Para trabalhos futuros, seria interessante experimentar diferentes aromas para ver qual disfarça melhor o sabor da microalga. Isso porque o aroma e sabor de muitas microalgas são considerados um dos principais problemas em relação à sua aplicação em produtos alimentares especialmente para aqueles que nunca provaram produtos à base de algas.
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