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Publicação
Detecção molecular de Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary, agente causal da podridão branca em alface (Lactuca sativa L.) pela reacção em cadeia de polimerase (PCR)
Orientador(es)
Resumo(s)
Neste trabalho estabeleceu-se um teste molecular, rápido e fácil, para detectar Sclerotinia
sclerotiorum, responsável pela doença da podridão branca da alface, em folhas assintomáticas.
Desenharam-se primers específicos (SSM) para ampliar sequências parciais da região ITS de S.
sclerotiorum, e utilizaram-se em reacções de PCR com alfaces infectadas. A análise das sequências
obtidas indicou homologia significativa com sequências de S. sclerotiorum já conhecidas. Usaram-se
os primers SSM com alfaces infectadas com Bremia lactucae e Botrytis cinerea verificando-se que
apenas ampliavam fragmentos nas amostras com B. cinerea. A sequenciação destes fragmentos
sugeriu a presença de sequências parciais de B. cinerea e também de Alternaria sp., além de S.
sclerotiorum. Os fragmentos de S. sclerotiorum e Alternaria sp., com tamanho semelhante, poderão
distinguir-se pela digestão dos produtos de PCR com RsaI. Alguns isolados de B. cinerea poderão ser
discriminados com HindIII, mas não todos, já que outros apresentam sequências idênticas às
identificadas em S. sclerotiorum. Estabeleceu-se uma reacção de PCR multiplex conjugando os
primers SSM com os primers Br, específicos para ampliar sequências parciais da região ITS de B.
lactucae, para detectar simultaneamente os patogénios referidos. A posterior digestão enzimática com
RsaI e HindIII permite discriminar alguns daqueles patogénios
Descrição
Mestrado em Engenharia Agronómica - Instituto Superior de Agronomia
Palavras-chave
Sclerotinia sclerotiorum Bremis lactucae Lactuca sativa alface PCR ITS
Contexto Educativo
Citação
Caldeira, C.A.O.L. - Detecção molecular de Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary, agente causal da podridão branca em alface (Lactuca sativa L.) pela reacção em cadeia de polimerase (PCR). Lisboa: ISA, 2010, 67 p., Anexos