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Publicação
Tipagem molecular e avaliação do potencial patogénico de Listeria monocytogenes
| Nome: | Descrição: | Tamanho: | Formato: | |
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Orientador(es)
Resumo(s)
Listeria monocytogenes is a foodborne, psychrotolerant and intracellular
pathogenic bacterium responsible for listeriosis, a serious infectious disease in
humans and animals.
With the purpose to better enlighten the risk of the consumption of food
contaminated with these bacteria, 168 isolates from food, humans, animal and
from environmental sources were analysed. The molecular characterization of the
isolates included serogrouping by Multiplex PCR (MPCR), Random Amplified
Polymorfic DNA (RAPD) and Pulsed-Field Gel Electrophoresis (PFGE) analysis.
The evaluation of virulence of the strains was assessed with plaque-forming assay
in HT-29 cell monolayers.
Among 74 food isolates, MPCR group 4 (4b-4d-4e) was the most prevalent
(41.9 %). The obtained results confirmed the higher discriminatory power of
PFGE (SID = 0.97) in comparison with the RAPD technique (SID = 0.85). The
query in Pathogen Tracker 2.0 of PFGE patterns allowed the identification of
universally disseminated and potentially dangerous clones. After exposing the
strains to refrigeration (7 ºC) and freezing (-20 ºC e -80 ºC) temperatures, the
virulence of the strains is significantly decreased (P < 0.05) after refrigeration
under starvation.
The analysis performed in this work suggests that food related isolates are
potentially pathogenic and stresses out the risk of listeriosis after consumption of
food contaminated with L. monocytogenes-----------------------------Listeria monocytogenes é uma bactéria patogénica intracelular, de origem
alimentar, psicrotolerante, responsável pela listeriose, uma doença infecciosa
grave, em humanos e animais.
Com o objectivo de melhor esclarecer o risco associado ao consumo de
alimentos contaminados com esta bactéria, foram analisados neste trabalho 168
isolados de L. monocytogenes de origem alimentar, clínica, animal e ambiental. A
caracterização molecular dos isolados incluiu a análise por Multiplex PCR
(MPCR), amplificação aleatória de DNA polimórfico (RAPD) e a electroforese
em campo pulsado (PFGE). A avaliação da virulência das estirpes foi feita através
de ensaios de formação de placas de lise (PFA) em monocamadas da linha celular
animal HT-29.
Em 74 isolados de origem alimentar, o grupo MPCR 4 (4b-4d-4e) foi o mais
prevalente (41,9 %). Os resultados obtidos confirmam o elevado poder
discriminatório da técnica PFGE (SID = 0,97) comparativamente à técnica RAPD
(SID = 0,85). A comparação dos perfis de PFGE na base de dados
Pathogen Tracker 2.0, permitiu a identificação de clones universalmente
disseminados e potencialmente perigosos. Os resultados obtidos após sujeição das
estirpes às temperaturas de refrigeração (7 ºC) e de congelação (-20 ºC e -80 ºC)
sugerem um abaixamento significativo (P < 0,05) da virulência, após refrigeração
dos isolados, na ausência de crescimento.
As análises efectuadas neste trabalho sugerem que os isolados alimentares
ou relacionados com o ambiente alimentar são potencialmente patogénicos e
enfatizam o risco de listeriose associado ao consumo de alimentos contaminados
com L. monocytogenes.
Descrição
Doutoramento em Engenharia Agro-Industrial - Instituto Superior de Agronomia
Palavras-chave
Listeria monocytogenes RAPD MPCR PFGE virulence animal cell culture HT-29 virulência cultura de células animais HT-29