Programming the type and localization of adaptive immunity by targeting TLR2: a strategy for the development of novel veterinary vaccines

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Programming mucosal immunity by targeting extramucosal dendritic cells with Oprl, a TLR2 ligand

Publication . Ramos, Stephanie Rachell Andaluz Almandoz; Basto, Afonso Silva Pinto; Dias, Deodália Maria Antunes,1952-

Um dos avanços médicos de maior sucesso na história da medicina moderna é, sem dúvida, a vacinação, que tem contribuído enormemente para a saúde humana e animal nos últimos 200 anos. No entanto, ainda enfrentamos muitas doenças para as quais nenhuma vacina eficaz ou segura pôde ser desenvolvida. A compreensão de como o sistema imunitário pode ser modulado para um tipo específico de resposta e como desenvolver estratégias imunomoduladoras para direcionar a localização específica de linfócitos são desafios atuais em imunologia. A conjugação de antigénios com ligandos de recetores de reconhecimento de padrões (PRR) é uma estratégia promissora para a modulação da imunidade específica e o TLR2 tem emergido como um recetor-chave para a indução de imunidade na mucosa. Nos últimos anos, o nosso grupo de investigação desenvolveu um sistema de clonagem em Escherichia coli para produzir antigénios em fusão com um ligando de TLR2, a lipoproteína OprI. Neste projeto, investigámos se a ativação TLR2 em células dendríticas (DCs) por OprI, sozinha ou combinada com outros estímulos, pode ser usada para determinar o tropismo de imunidade específica para a mucosa. A capacidade que as DCs de mucosa apresentam para induzir a localização de linfócitos na mucosa intestinal resulta da sua capacidade em converter vitamina A em ácido retinóico. Este processo depende da atividade de enzimas aldeído desidrogenase (ALDH), as quais são expressas em níveis baixos nas DCs extra-mucosa. Por PCR quantitativo em tempo real, observámos que a OprI induz a expressão de Aldh1a2 em DCs que não são de mucosa e mostramos, através de ensaios de Aldefluor, que esta expressão se traduz numa atividade ALDH funcional. Demonstramos ainda, através da co-cultura ex vivo de DCs de baço de ratinhos C57BL/6 com células T CD4+ específicas para ovalbumina (OVA) obtidas de ratinhos OT-II RAG2-/-, que a estimulação de células dendríticas com OprI converte de forma efetiva a vitamina A num sinal que imprime nas células T ativadas os recetores de tropismo para mucosa CCR9 e α4β7. Quando usada como adjuvante, a lipoproteína OprI induz um perfil Th misto e experiências preliminares desenvolvidas pelo nosso grupo mostraram que a sua associação com MPLA (um ligando de TLR4) é uma estratégia promissora para ativar DCs com potencial polarizador Th1. Através da estimulação ex vivo de DCs de baço de ratinho e de co-cultura com células OT-II, podemos confirmar, por ELISA de IFN-γ, o favorecimento de uma polarização Th1 induzido pela combinação de OprI com MPLA. Mais importante, os ensaios de Aldefluor e a avaliação por citometria de fluxo da expressão superficial dos recetores CCR9 e α4β7 nas células OT-II em co-cultura mostram que a OprI, quando combinada com MPLA, não perde a capacidade de equipar as DCs com propriedades indutoras de respostas de mucosa. Os nossos resultados evidenciam a OprI como um adjuvante promissor para indução de respos tas imunitárias na mucosa intestinal desencadeadas por inoculação parentérica. Estas descobertas poderão contribuir para o desenvolvimento de vacinas mais eficazes contra agentes patogénicos que utilizam a mucosa intestinal como porta-de-entrada no organismo.

2020Dissertação de mestrado

Acesso aberto

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Entidade financiadora

Fundação para a Ciência e a Tecnologia

Programa de financiamento

3599-PPCDT

Número da atribuição

PTDC/CVT-CVT/31840/2017