Graça, Luís Ricardo Simões da SilvaRibeiro, Filipa Ramos de MouraAntunes, Diogo Alves2024-02-272023-06http://hdl.handle.net/10451/62971Trabalho Final do Curso de Mestrado Integrado em Medicina, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, 2023Após interagirem com linfócitos T foliculares helper (TFH), os linfócitos B do centro germinal (CG) produzem anticorpos de alta afinidade. A reação CG é regulada por linfócitos TFR. O estudo dos linfócitos TFR humanos do tecido linfoide está condicionado pela inexistência de uma forma eficaz de isolar estas células, visto que o fator de transcrição Foxp3 não pode ser marcado para manter a viabilidade celular. Os linfócitos TFR circulantes e do tecido linfoide correspondem a diferentes populações, não se conhecendo a sua capacidade supressora relativa. Avaliámos a eficácia de uma nova estratégia que seleciona linfócitos TFR do tecido linfoide CXCR5lo/int CD25+ em vez de CXCR5hi CD25+ (normalmente utilizada), simulando ambas as estratégias e medindo o número de linfócitos TFR Foxp3+ hipoteticamente isolados. Também comparámos a capacidade supressora dos linfócitos TFR circulantes e do tecido linfoide, ao fazer co-culturas com linfócitos B naïve, TFH e TFR, que foram estimuladas com antigénio, para avaliar os níveis de ativação dos linfócitos B e de proliferação dos linfócitos TFH. Finalmente, estudámos a expressão de 361 proteínas em linfócitos TFR para identificar futuros marcadores que possam substituir o CD25 para isolar linfócitos TFR CXCR5hi. Observámos que, ao selecionar linfócitos TFR de amígdalas humanas CXCR5lo/int ao invés de CXCR5hi, obtemos maiores frequências relativas de linfócitos TFR CD25+. Quando comparámos a supressão dos linfócitos TFR circulantes e do tecido linfoide, detetámos que os últimos reduzem mais eficazmente o número de linfócitos TFH que proliferam, quando comparados com os linfócitos TFR circulantes. Identificámos também o GARP, LILRA-2, SSEA-3 e TRA-1-81 como marcadores promissores para isolar linfócitos TFR do tecido linfoide viáveis. Apesar de ser necessário validar estes achados, acreditamos que os mesmos evidenciam a heterogeneidade funcional dos linfócitos TFR circulantes e do tecido linfoide.Após interagirem com linfócitos T foliculares helper (TFH), os linfócitos B do centro germinal (CG) produzem anticorpos de alta afinidade. A reação CG é regulada por linfócitos TFR. O estudo dos linfócitos TFR humanos do tecido linfoide está condicionado pela inexistência de uma forma eficaz de isolar estas células, visto que o fator de transcrição Foxp3 não pode ser marcado para manter a viabilidade celular. Os linfócitos TFR circulantes e do tecido linfoide correspondem a diferentes populações, não se conhecendo a sua capacidade supressora relativa. Avaliámos a eficácia de uma nova estratégia que seleciona linfócitos TFR do tecido linfoide CXCR5lo/int CD25+ em vez de CXCR5hi CD25+ (normalmente utilizada), simulando ambas as estratégias e medindo o número de linfócitos TFR Foxp3+ hipoteticamente isolados. Também comparámos a capacidade supressora dos linfócitos TFR circulantes e do tecido linfoide, ao fazer co-culturas com linfócitos B naïve, TFH e TFR, que foram estimuladas com antigénio, para avaliar os níveis de ativação dos linfócitos B e de proliferação dos linfócitos TFH. Finalmente, estudámos a expressão de 361 proteínas em linfócitos TFR para identificar futuros marcadores que possam substituir o CD25 para isolar linfócitos TFR CXCR5hi. Observámos que, ao selecionar linfócitos TFR de amígdalas humanas CXCR5lo/int ao invés de CXCR5hi, obtemos maiores frequências relativas de linfócitos TFR CD25+. Quando comparámos a supressão dos linfócitos TFR circulantes e do tecido linfoide, detetámos que os últimos reduzem mais eficazmente o número de linfócitos TFH que proliferam, quando comparados com os linfócitos TFR circulantes. Identificámos também o GARP, LILRA-2, SSEA-3 e TRA-1-81 como marcadores promissores para isolar linfócitos TFR do tecido linfoide viáveis. Apesar de ser necessário validar estes achados, acreditamos que os mesmos evidenciam a heterogeneidade funcional dos linfócitos TFR circulantes e do tecido linfoide.engAutoimunidadeFator de transcrição Foxp3Centro germinalLinfóctios T foliculares reguladoresImunologiamaster thesis203403290