Oliveira, Maria Margarida da Costa Ferreira Correia deBarros, Pedro MiguelOliveira, Cristina Maria Moniz SimõesVieira, Natacha Cristiana dos Santos2017-07-202020-01-012017Vieira, N.C.S. - Identification of transcription factors regulating cork oak UNK1 gene during abiotic stress response. Lisboa: ISA, 2017http://hdl.handle.net/10400.5/13961Mestrado em Engenharia Agronómica - Protecção das Plantas - Instituto Superior de Agronomia - ULO sobreiro (Quercus suber L.) é uma árvore autóctone do Mediterrâneo que desempenha um papel-chave no seu ecossistema. A relevância económica da espécie, aliada ao seu declínio populacional, tanto devido a ameaças biológicas (ex.: P. cinnamomi), como abióticas (ex.: calor e secura), levaram a um acrescido interesse nesta árvore. Num projecto anterior (SuberStress) do laboratório de acolhimento foram selecionados 10 genes diferencialmente expressos em diferentes stresses aplicados separadamente, entre eles QsUNK1, de função desconhecida. Para a caracterização de QsUNK1 foram inicialmente determinadas as sequências genómica (2264pb com três intrões de 819, 486 e 506pb) e do promotor (identificados 1220pb). Por “Yeast-1-Hybrid” (Y1H) identificaram-se cinco potenciais factores de transcrição (TFs) por rastreio de uma biblioteca de cDNAs de stresse abiótico (calor e secura) com “baits” de levedura contendo parte do promotor (-797 a -260pb). Para a validação funcional deste gene utilizaram-se duas linhas descritas como mutantes no gene homólogo em Arabidopsis (AT3G55646). Plântulas de Arabidopsis (selvagens e mutantes) e plantas de sobreiro foram sujeitas a ensaios de calor, por choque ou aclimatação. Por análise da expressão em sobreiro, verificou-se indução de QsUNK1 em ambas as condições de stresse. Em Arabidopsis, AtUNK1 não revelou variações de expressão claras, pelo que o gene não está a ser silenciado. Igualmente não se confirmou o “knockout” nas duas linhas analisadas. Para validar a ligação TF-promotor e efectuar estudos funcionais, foram desenvolvidas linhas embriogénicas de sobreiroengsobreirostress abióticoregulação génicaY1Hfator de transcriçãomaster thesis203650514