Markovič, TijanaSilva, Isabel Bettencourt Moreira daGirão, Marta Castela Graça Choupeiro2025-06-262024-11-212024-11-04http://hdl.handle.net/10400.5/101799Trabalho Final de Mestrado Integrado, Ciências Farmacêuticas, 2024, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia.Esta tese pretende avaliar e explorar potenciais abordagens terapêuticas para a Leucemia Linfocítica Crónica in vitro, através de uma investigação focada na eficácia de diferentes fármacos aprovados (venetoclax e acalabrutinib) e não aprovados (inibidor Lck, dasatinib, saracatinib) para a LLC, bem como o potencial de interação sinérgica entre estes compostos. A LLC, uma neoplasia hematológica maligna caracterizada pela proliferação clonal de linfócitos B, apresenta uma heterogeneidade clínica significativa e é alvo de preocupações emergentes quanto à resistência às terapêuticas convencionais, levando à necessidade de explorar novas opções terapêuticas. Os ensaios de IC50 e sinergia realizados foram efectuados em duas linhas celulares diferentes, MEC-1, derivada de células B leucémicas crónicas, e MEC-1 VER, representando o mesmo tipo de células com resistência adquirida ao tratamento. Os resultados apresentam um intervalo diversificado de valores IC50, indicando níveis variáveis de sensibilidade entre as linhas celulares a cada fármaco, com a linha celular resistente a ser geralmente menos sensível ao tratamento. O venetoclax apresentou o valor IC50 mais baixo para ambas as linhas celulares, enquanto o acalabrutinib necessitou de concentrações mais elevadas para obter um efeito inibitório semelhante. Os medicamentos não aprovados também apresentaram resultados indicativos de uma potencial utilização na LLC, dado que os seus valores estimados de IC50 não foram consideravelmente superiores aos dos fármacos aprovados. Adicionalmente, o estudo investiga os efeitos sinérgicos das combinações entre os fármacos aprovados e cada fármaco não aprovado, utilizando os modelos de aditividade Loewe e de independência Bliss, que não refletem com precisão as interações complexas entre fármacos e são portanto utilizados como uma abordagem exploratória de dados. Os resultados destes ensaios suscitam uma investigação aprofundada, uma vez que apresentam uma disparidade notável de resultados entre os dois modelos para os mesmos pares de fármacos, com o modelo Bliss a sugerir um grau generalizado de sinergia para as combinações com acalabrutinib. Na sua globalidade, estes resultados pretendem informar e contribuir para a evolução do panorama terapêutico da LLC, reforçando a necessidade de uma avaliação contínua de novos agentes terapêuticos para doenças malignas crónicas predominantes, como a LLC, de modo a combater as suas resistências adquiridas.This thesis aims to evaluate and explore potential therapeutic approaches for Chronic Lymphocytic Leukemia in vitro, through research focused on the efficacy of different approved (venetoclax and acalabrutinib) and unapproved (Lck inhibitor, dasatinib, saracatinib) drugs for CLL, as well as the potential for synergistic interaction between them. CLL, a hematological malignancy characterized by the clonal proliferation of B lymphocytes, presents significant clinical heterogeneity and has had emerging concerns of resistance to conventional therapies, prompting the need to explore new therapeutic options. The IC50 and Synergy assays conducted were performed on two different cell lines, MEC-1, derived from CLL B cells, and MEC-1 VER, representing the same type of cells with acquired drug resistance. The results present a diverse range of IC50 values, indicating varying levels of sensitivity among the cell lines to each drug, with the resistant cell line notably being generally less sensitive to treatment. Venetoclax exhibited the lowest IC50 value in both cell lines, while acalabrutinib required higher concentrations to achieve a similar inhibitory effect. The non-approved drugs also presented results indicative of potential use in CLL, given their estimated IC50 values were not considerably superior from the ones presented in each approved drug. Additionally, the study investigates the synergistic effects of drug combinations between the approved drugs with each non-approved drug, using the Loewe additivity and Bliss independence models, which do not accurately reflect complex drug interactions, and therefore, are used as an approach to data exploration. The synergy assay results elicit further investigation, as they present a distinctive disparity of results between the two models for the same drug pairs, with the Bliss model suggesting an overall degree of synergy for acalabrutinib combinations. Overall, these findings aim to contribute with valuable insights into the evolving landscape of CLL treatment and further elucidate the need for continuous evaluation of new therapeutic agents in the context of predominant chronic malignancies such as CLL and overcoming their acquired resistances.engChronic lymphocytic leukemiaVenetoclaxAcalabrutinibAcquired resistanceCombination therapyMestrado Integrado - 2024master thesis203912713