Lovšin, Marija NikaGama, Maria João Carlos da SilvaCosta, Margarida Caetano2024-04-182024-04-182023-11-232023-11-02http://hdl.handle.net/10451/64398Trabalho Final de Mestrado Integrado, Ciências Farmacêuticas, 2023, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia.A pandemia global causada pelo Coronavírus 2 da Síndrome Respiratória Aguda Grave (SARS-CoV-2) despertou uma necessidade urgente de compreender as interações do vírus com o hospedeiro humano a nível molecular. Os efeitos nocivos da Doença por Coronavírus 2019 (COVID-19) são cada vez mais atribuídos a danos imunopatológicos causados pelo aumento das citocinas pró-inflamatórias, estabelecendo uma ligação entre a tempestade de citocinas e as complicações graves da doença. As proteínas APOBEC pertencem a uma família de deaminases de citidina responsáveis pela edição da sequência de ADN e ARN, desempenhando papéis fundamentais numa vasta gama de processos biológicos, incluindo respostas imunitárias, propriedades antivirais e mutações genéticas. Neste trabalho, investigamos e reportamos dados sobre o efeito das proteínas estruturais do SARS-CoV-2 - Envelope (E), Spike (S), Nucleocápside (N) e Membrana (M) - na expressão das citocinas Interleucina 8 (IL-8) e Fator de Necrose Tumoral-alfa (TNF-α), e das proteínas APOBEC3s - APOBEC3B, APOBEC3F e APOBEC3G - nas linhas celulares humanas, Huh-7 e A549. Apesar de existir evidência científica acerca dos efeitos do SARS-CoV-2 na cascata inflamatória, a literatura atual referente ao impacto do SARS-CoV-2 na expressão das APOBEC é escassa. Desta forma, focámo-nos em conceber um protocolo para quantificarmos o efeito das proteínas estruturais do SARS-CoV-2 na expressão de citocinas inflamatórias e APOBECs acima mencionadas, através do método de qPCR. Os nossos resultados revelam uma relação complexa entre as proteínas estruturais do SARS-CoV-2 e a resposta imunitária do hospedeiro, visto que certas proteínas estruturais virais modulam a expressão de citocinas, contribuindo potencialmente para as respostas imunitárias desreguladas observadas nos doentes com COVID-19. Além disso, os resultados obtidos apontam para possíveis interações entre as proteínas virais e as APOBEC. Este estudo contribui para compreensão das interações vírus-hospedeiro no contexto da infeção por SARS-CoV-2 e fornece alguma informação sobre potenciais alvos terapêuticos com vista a atenuar as consequências imunopatológicas da doença.The global pandemic caused by Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2 (SARS-CoV-2) triggered an urgent need to understand the virus's interactions with the human host at the molecular level. The detrimental effects of Coronavirus disease 19 (COVID-19) are increasingly attributed to immunopathological damage caused by increased pro-inflammatory cytokines, establishing a link between the cytokine storm and severe complications of the disease. The Apolipoprotein B mRNA editing catalytic polypeptide-like (APOBEC) proteins belong to a family of cytidine deaminases responsible for DNA and RNA sequence editing, playing pivotal roles in a wide range of biological processes, including immune responses, antiviral properties, and genetic mutations. In this work, we investigate and report data of the effect of SARS-CoV-2 structural proteins - Envelope (E), Spike (S), Nucleocapsid (N) and Membrane (M) - on the expression of cytokines Interleukin 8 (IL-8) and Tumor Necrosis Factor-alpha (TNF-α), and APOBEC3s proteins (APOBEC3B, APOBEC3F and APOBEC3G) genes in Huh-7 and A549 human cell lines. While there is a lot of scientific evidence about the effects of SARS-CoV-2 on the inflammatory cascade, the current literature regarding the impact of SARS-CoV-2 on APOBEC expression is scarce. Therefore, we focused on designing a protocol to quantify the effect of SARS-CoV-2 structural proteins on the expression of the aforementioned inflammatory cytokines and APOBECs using qPCR. Our findings reveal a complex relationship between SARS-CoV-2 structural proteins and the host immune response, as certain viral structural proteins modulate cytokines expression, potentially contributing to the dysregulated immune responses seen in COVID-19 patients. Additionally, our research uncovered interactions between viral proteins and APOBEC genes. This study contributes to a better understanding of the host-virus interactions in the context of SARS-CoV-2 infection and provides some insights into potential therapeutic targets for mitigating the immunopathological consequences of the disease.engSars-CoV-2APOBEC3BAPOBEC3FAPOBEC3GIL-8TNF-alphaMestrado Integrado - 2023master thesis203511999