Ferreira, João António AugustoFonseca, Maria de Carmo S. V. R.Ferreira, Fernando António da Costa2008-11-282008-11-282008http://hdl.handle.net/10400.5/224Projectos de Investigação no âmbito dos quais o trabalho foi realizado:2001/05 - Cell biology of human topoisomerase IIα (Fundação para a Ciência e a Tecnologia – Programa Operacional Ciência, Tecnologia e Inovação/BCI/36194/2000. 2005/07 - Topoisomerases: at the border between DNA replication and chromatin structure (Fundação para a Ciência e a Tecnologia – Programa Operacional de Ciência e Inovação/BIA-BCM/63368/2004)Tese de Doutoramento em Ciências VeterináriasNeste trabalho foi estudado o papel das topoisomerases celulares (I, IIα e IIβ) na replicação, usando os adenovírus como modelo. Os adenovírus apresentam um genoma de ADN de cadeia dupla e são responsáveis por infecções respiratórias, gastro-intestinais, oftalmológicas, neurológicas e genito-urinárias. São organismos ubiquitários, infectam passáros e a maioria dos mamíferos, incluindo o Homem. Com efeito, a importância destes vírus tem vindo a aumentar por surgirem associados a novos quadros nosológicos (imunodeficiências, transplantes de órgãos) e por poderem vir a funcionar como vectores terapêuticos em doenças genéticas e na viroterapia do cancro. No presente trabalho (1) analisámos a distribuição das topoisomerases I, IIα e IIβ no núcleo de células infectadas, com utilização de tecnologias modernas de microscopia, (2) caracterizámos funcionalmente os locais de acumulação destas enzimas, (3) testámos se a replicação e a transcrição virais eram necessárias ao seu recrutamento, (4) estudámos a dinâmica das topoisomerases I e IIα in vivo por FRAP, (5) realizámos a analise mutacional da topoisomerase I e (6) quantificámos as concentrações e actividades catalíticas das topoisomerases antes e depois da infecção. Por fim, (7) abordámos a conexão funcional entre estas proteínas celulares e a replicação do vírus por depleção selectiva de cada topoisomerase (siRNA), evitando os efeitos genotóxicos dos fármacos antitopoisomerase. Os resultados obtidos permitem concluir que ambos os tipos de topoisomerases (I e II) são utilizados pelo adenovírus durante a sua replicação, mas que o seu papel é diferencial, com relevo inesperado para as topoisomerases IIα e IIβ. Estes resultados sugerem que as topoisomerases poderão ser potenciais alvos na terapêutica de patologias infecciosas e potenciais factores preditivos na terapêutica viral do cancro.porTopoisomerases celularesAdenovírusReplicação genómicaCancroCellular topoisomerasesAdenovirusGenome replicationCancerdoctoral thesis