Gonçalves, JoãoSantos, Miguel Roque2019-10-312019-10-312018-12-192018http://hdl.handle.net/10451/40030Tese de mestrado, Ciências Biofarmacêuticas, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2018The use of therapeutic mAbs as the anti-TNFa agents has been known not to cure, but treat auto-immune diseases such as the inflammatory bowel diseases (IBD), improving the overall quality of life of patients. These therapeutic mAbs are characterized by their high specificity allowing to block therapeutic targets as pro-inflammatory cytokines such as TNFa. However, as mAbs are biological drugs, called proteins. Their fundamental disadvantage is the risk of inducing immunogenicity, which can affect the effectiveness and safety of the drug, leading to loss of therapeutic response in patients. This phenomenon is called LoR. For that reason, it is necessary to monitor the treatment of these drugs, also referred to as TDM. Developing therapeutic mAbs is a complex and expensive process due to the complexity of the protein molecular structure. It requires carefully production, storage and quality control, which reflects to their high cost. Since the patent of therapeutic mAbs has expired, many manufacturers have taken the opportunity to introduce biosimilar drugs to the market. This has allowed for national health systems to spend less resources, making it accessible to more patients. CT-P13 was the first biosimilar drug of Infliximab to be approved by EMA in 2013, after the drug showed similar effectiveness and safety in rheumatoid arthritis and ankylosing spondylitis patients in two main studies called PLANETRA and PLANETRAS. Based on the results obtained in these studies the therapeutic indication of CT-P13 was extrapolated to the IBD in 2014 which leads to some mistrust in relation of the efficacy and safety of biosimilar in IBD patients. Doubts of extrapolation seem to be a non-issue nowadays since the post-commercialize studies attest to the similarity of CT-P13 face to the original drug. However, doubts relating to switching, multiple-switching, reverse-switching and cross-switching still persist. To evaluate if these drugs are similar, a comparison is done of drug and other levels and ADAs. The ELISA essays have been widely used and stand out due to it’s simplicity.To measure a patients ADAs level bELISA, which is a type of ELISA can be used, even though bELISA has it’s limitations. The presence of drug and IgG4 subtype ADAs are described as being factors that difficult the ADAs detection which makes with the same detection depending on the sensibility of each commercial kit, although these differences may not be significant. The aim of this study is to evaluate immunogenic response in patients treated with biosimilar CT-P13 through the detection of the drug and CT-P13 in order to verify how the presence of ADAs interferes with pharmacokinetics. Mapping epitopes of biosimilar and anti-Remicade ADAs with resource to an in house ELISA study, can verify which drugs are most immunogenic between IBD patients. Another in house ELISA study was done in order to map epitopes of anti-biosimilar and anti-Remicade ADAs subtype IgG4. Ultimately, a neutralization study was done to detect the presence of neutralizing antibodies (NADAs). In general, the data presented in this study suggests that CT-P13 and Remicade are similar in inducing an immune response in IBD patients, corroborating with others studies described. Therefore the switching between Remicade and biosimilar should not be motive of mistrust in terms of effectiveness and safety.O uso de mAbs terapêuticos tais como os agentes anti-TNFa têm permitido, não curar mas sim tratar, doenças auto-imunes como as doenças inflamatórias intestinais (DII), melhorando assim a qualidade de vida dos doentes que as vivenciam. Estes mAbs terapêuticos caracterizam-se pela sua alta especificidade permitindo bloquear alvos terapêuticos como citocinas pró-inflamatórias tais como o TNFa. Porém os mAbs terapêuticos uma vez tratando-se de medicamentos biológicos, nomeadamente proteínas, têm como fundamental desvantagem poder induzir nos doentes imunogenicidade que pode afectar a eficácia e a segurança destes fazendo com que os doentes deixem de responder à terapêutica, fenómeno designado por LoR que torna necessário a monitorização da terapêutica destes fármacos designada por TDM. Desenvolver mAbs terapêuticos é um processo complexo e dispendioso devido à complexidade da estrutura molecular das proteínas que requer cuidados na produção, armazenamento e controlo de qualidade o que se reflecte no seu custo elevado. A queda das patentes dos mAbs terapêuticos deu oportunidade à introdução de medicamentos biosimilares no mercado que por não terem de ser submetidos a todos os estudos a que os originais tiveram de ser sujeitos, são mais económicos permitindo que os sistemas nacionais de saúde possam economizar verba e com que mais doentes possam usufruir da terapêutica. O CT-P13 foi o primeiro biosimilar do Infliximab original a ser aprovado pela EMA em 2013 após o fármaco ter demonstrado eficácia e segurança similares nos doentes com atreite reumatóide e espondilite anquilosante em dois estudos principais denominados de PLANETRA e PLANETRAS. Com base nos resultados obtidos nestes estudos a indicação terapêutica do CT-P13 foi extrapolada para a DII em 2014, o que levantou alguma desconfiança em relação à eficácia e segurança do biosimilar nos doentes com DII. A questão da extrapolação parece estar ultrapassada nos dias que decorrem uma vez que estudos de pós comercialização atestam a similaridade do CT-P13 face ao produto de referência. Porém dúvidas persistem em relação à substituição (switching), múltiplo-switching, o switching -reverso e switching-cruzado. A avaliação da similaridade destes fármacos tem sido efectuada por medição do perfil de fármaco e de anticorpos antifármaco (ADAs). Para medir estes parâmetros destacam-se os ensaios de ELISA que têm sido vastamente utilizados devido à simplicidade de execução desse tipo de ensaio. Na medição de ADAs pode ser salientado bELISA, contudo está documentado algumas limitações deste tipo de ensaio na detecção de ADAs. A presença de fármaco e de ADAs do subtipo IgG4 estão descritas como sendo factores que dificultam a detecção de ADAs o que faz com que essa mesma detecção dependa da sensibilidade de cada kit comercial embora as diferenças possam não ser significativas. O objectivo deste estudo foi avaliar a resposta imunogénica dos doentes tratados com o biosimilar CT-13 pela detecção de fármaco e de CT-P13 a fim de verificar como a presença de ADAs interfere com a farmacocinética. Mapear os epitopos dos ADAs anti-biosimilar e anti-Remicade com recurso a um ensaio de ELISA in house, de modo a verificar qual dos fármacos é mais imunogénico entre os doentes com DII, sendo que à parte foi optimizado e realizado outro ELISA in house no sentido de mapear epitopos de anti biosimilar e anti Remicade ADAs do subtipo IgG4. Por último realizou-se um ensaio de neutralização para deteção da presença de anticorpos neutralizantes (NADAs). No geral os dados apresentados neste trabalho sugerem que o CT-P13 e Remicade são similares na resposta imune que induzem nos doentes com DII o que corrobora com outros estudos descritos. Assim sendo assim o switching entre o Remicade e o biosimilar não deverá ser motivo de desconfiança em termos de segurança e efectividade.engADAs: CT-P13ImmunogenicityNADAsTDMTeses de mestrado - 2018master thesis202251667