Tavares, ÁlvaroGomes, Rui Artur Paiva LoureiroLousa, Inês Saramago dos Santos2023-09-112023-09-1120232022http://hdl.handle.net/10451/59198Tese de Mestrado, Biologia Molecular e Genética, 2022, Universidade de Lisboa, Faculdade de CiênciasGarantir a propagação fiel da informação genética através das gerações é um dos problemas mais fundamentais da biologia celular. MOB4, proteína integrante do complexo proteico STRIPAK, é um dos membros da família de proteínas MOB conhecidas por regular a mitose. Estudos de RNAi previamente desenvolvidos no nosso laboratório mostraram que a supressão de MOB4 promove defeitos mitóticos e um bloqueio no checkpoint na transição metafase/anafase em células humanas, caracterizando-o como um novo elemento essencial à correta segregação cromossómica. Este projeto tem como objetivo definir as funções moleculares de MOB4, especialmente o seu papel em mitose e perceber se os erros observados e o bloqueio em mitose se dão devido e exclusivamente ao MOB4 ou por este estar integrado no complexo STRIPAK. No decurso deste trabalho achámos também pertinente estudar a proteína MOB2 e a sua função em mitose. Começámos por estudar a dinâmica intracelular de MOB4 utilizando duas linhas celulares HeLa pela técnica de Imunofluorescência. Fomos igualmente testar a universalidade da sua função em células diploides tumorais como as HCT116, e não tumorais como as hTERT-RPE-1 através de estudos de RNAi. Por Imunofluorescência determinámos que MOB4 se localiza no Complexo de Golgi em Interfase. No entanto, não foi observada uma localização mitótica específica. Os resultados obtidos dizem-nos que a sua função parece ser conservada em células HCT116 uma vez que foram observados defeitos após depleção de MOB4, embora não ter sido observado um bloqueio no checkpoint. Também foi observado que componentes do complexo STRIPAK não só parecem ser necessários para que o bloqueio seja ultrapassado, como a sua falta promove defeitos mitóticos semelhantes aquando depleção exclusiva do MOB4. Deste modo deduzimos que MOB4 não atua sozinho, mas sim em conjunto com o STRIPAK. A MOB2 possui uma função ao nível do fuso mitótico e promove igualmente um bloqueio no checkpoint mitótico.Ensuring the faithful propagation of genetic information across generations is one of the most fundamental problems in cell biology. MOB4, a protein that is part of the STRIPAK protein complex, is one of the members of the MOB protein family known for regulate mitosis. RNAi studies previously developed in our laboratory showed that MOB4 suppression promotes mitotic defects and a checkpoint block in the metaphase/anaphase transition in human cells, characterizing it as a new essential element for correct chromosomal segregation. This project aims to define the molecular functions of MOB4, especially its role in mitosis and understand whether the observed errors and the blockage in mitosis are due and exclusively to MOB4 or because it is integrated into the STRIPAK complex. We also found it pertinent to study the MOB2 protein and its role in mitosis. We started to study the intracellular dynamics of MOB4 using two HeLa cell lines by Immunofluorescence technique. We also tested the universality of its function in diploid tumor cells such as HCT116, and non-tumor cells such as hTERT-RPE-1 by RNAi assays. By Immunofluorescence we determined that MOB4 is located in the Golgi Complex in Interphase. However, no specific mitotic localization was observed. The results obtained tell us that its function seems to be conserved in HCT116 cells since defects were observed after MOB4 depletion, although a checkpoint blockade was not observed. It was also observed that components of the STRIPAK complex not only appear to be necessary for the blockade to be overcome, but its lack promotes mitotic defects similar to exclusive MOB4 depletion. In this way we deduce that MOB4 does not act alone, but in conjunction with STRIPAK. MOB2 has a function at the level of the mitotic spindle and promotes a blockade in the mitotic checkpoint.porMOB4STRIPAKMitoseTransição metafase/anafaseTeses de mestrado - 2023master thesis203486765