Lucas, Susana DiasCarvalho , Luís Miguel Afonso Ramos de2017-12-272017-12-2720132013http://hdl.handle.net/10451/30197Trabalho Final de Mestrado Integrado, Ciências Farmacêuticas, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2013As proteases estão envolvidas em mecanismos críticos que regulam a homeostasia e a doença. O estudo da atividade das proteases é importante para a compreensão de mecanismos fisiopatológicos e no processo de descoberta de novos fármacos. Devido à grande complexidade de mecanismos reguladores da atividade das proteases in vivo, uma medida da quantidade de enzima existente difere significativamente da sua atividade. Métodos tradicionais de proteómica proporcionam informação quantitativa em relação às enzimas mas não fornecem informação sobre a regulação da atividade das mesmas. A determinação do perfil proteico com base na atividade enzimática é uma metodologia proteómica que permite medir diretamente a atividade de proteases, utilizando sondas baseadas na atividade enzimática, que possuem um grupo reativo que direciona a sonda à forma ativa das enzimas e uma tag que permite a análise posterior das enzimas alvo. Avanços recentes permitiram a medição em tempo real da atividade de proteases e varrimento de alto rendimento de proteases em proteomas complexos. A aplicação desta técnica beneficiou o estudo do cancro e das doenças infeciosas, entre outras áreas. Este trabalho apresenta uma visão geral da técnica de determinação do perfil proteico com base na atividade enzimática, o desenho racional e aplicação das sondas para o estudo de diversas classes de enzimas e as várias aplicações do método.Proteases play a critical role in mechanisms that regulate homeostasis and disease. The study of protease activity is important in the understanding of pathophysiological mechanisms and in the drug discovery process. Due to the high complexity of protease regulation in vivo, protease activity differs significantly from quantity. Traditional proteomic methods provide information on enzyme abundance but not on the regulation of protease activity. Activity-based protein profiling has emerged as a powerful chemical proteomic strategy to directly measure protease activity and allow characterization of enzyme function directly in whole proteomes. This method uses activity-based probes, which possess a reactive group to target only the active form of enzymes and a tag to allow downstream analysis of target enzymes. Recent advances in this field have allowed the real-time in vivo imaging of proteases and high-throughput screening of proteases in complex proteomes. The application of this technique in protease study has benefited the research fields of cancer and infectious diseases, among others. This work presents an overview of the activity-based protein profiling method, the rational design and application of activity-based probes to target several classes of enzymes and its numerous applications.engProteaseEnzymeActivityProbeInhibitorMestrado Integrado - 2013master thesis