Monteiro, António AlmeidaMota, Mariana GomesCaldeira, Cláudia Alexandra Oliveira Lopes2018-04-022018-04-022010Caldeira, C.A.O.L. - Detecção molecular de Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary, agente causal da podridão branca em alface (Lactuca sativa L.) pela reacção em cadeia de polimerase (PCR). Lisboa: ISA, 2010, 67 p., Anexoshttp://hdl.handle.net/10400.5/15180Mestrado em Engenharia Agronómica - Instituto Superior de AgronomiaNeste trabalho estabeleceu-se um teste molecular, rápido e fácil, para detectar Sclerotinia sclerotiorum, responsável pela doença da podridão branca da alface, em folhas assintomáticas. Desenharam-se primers específicos (SSM) para ampliar sequências parciais da região ITS de S. sclerotiorum, e utilizaram-se em reacções de PCR com alfaces infectadas. A análise das sequências obtidas indicou homologia significativa com sequências de S. sclerotiorum já conhecidas. Usaram-se os primers SSM com alfaces infectadas com Bremia lactucae e Botrytis cinerea verificando-se que apenas ampliavam fragmentos nas amostras com B. cinerea. A sequenciação destes fragmentos sugeriu a presença de sequências parciais de B. cinerea e também de Alternaria sp., além de S. sclerotiorum. Os fragmentos de S. sclerotiorum e Alternaria sp., com tamanho semelhante, poderão distinguir-se pela digestão dos produtos de PCR com RsaI. Alguns isolados de B. cinerea poderão ser discriminados com HindIII, mas não todos, já que outros apresentam sequências idênticas às identificadas em S. sclerotiorum. Estabeleceu-se uma reacção de PCR multiplex conjugando os primers SSM com os primers Br, específicos para ampliar sequências parciais da região ITS de B. lactucae, para detectar simultaneamente os patogénios referidos. A posterior digestão enzimática com RsaI e HindIII permite discriminar alguns daqueles patogéniosporSclerotinia sclerotiorumBremis lactucaeLactuca sativaalfacePCRITSmaster thesis