Gaspar, Helena Margarida Guerreiro GallaCordeiro, Carlos Alberto AlvesOliveira, Ana Sofia Vieira dos Reis Ferreira de2024-04-052024-04-0520242023http://hdl.handle.net/10451/63987Tese de Mestrado, Química, 2024, Universidade de Lisboa, Faculdade de CiênciasOs esteroides anabolizantes androgénicos (EAA) são derivados sintéticos que mimetizam o efeito da testosterona, permitindo aos atletas ganhar níveis mais elevados de massa muscular. Em Portugal, a Polícia Judiciária (PJ) e o Laboratório de Análise de Dopagem (LAD) são as duas entidades responsáveis pelo controlo destas substâncias, em amostras apreendidas e biológicas, respetivamente. No entanto, a deteção do abuso destas substâncias em amostras biológicas apresenta um desafio adicional, dado que alguns anabolizantes são também biossintetizados. O presente trabalho assenta na identificação de EAA em amostras apreendidas (comprimidos e soluções oleosas) e biológicas (urina). Neste âmbito, os principais objetivos deste estudo foram identificar EAA em material apreendido em Portugal, por Cromatografia em Fase Gasosa Acoplada à Espectrometria de Massa (GC-MS), bem como otimizar a metodologia de preparação de amostra. Avaliar, ainda, a adequabilidade da Espetrometria de Massa de Ressonância Ciclotrónica de Ião com Transformada de Fourier (FT-ICR-MS), capaz de determinar a estrutura isotópica fina de uma molécula, na deteção do consumo de EAA, através da medição da razão isotópica 13C/ 12C. Primeiramente, foram analisadas 51 amostras suspeitas de conter EAA, com o intuito de identificar os possíveis anabolizantes presentes. Constatou-se que 75% das amostras apresentavam uma composição distinta da declarada no rótulo, tendo sido identificados 17 EAA distintos. Ainda, em 45% das amostras não se verificou a presença de quaisquer anabolizantes. Relativamente à otimização da metodologia de preparação de amostra, constatou-se que a mistura de solventes clorofórmio/metanol (1:1) apresentava a maior afinidade com os analitos sob estudo. No FT-ICR-MS, foi inicialmente conduzido um estudo de reprodutibilidade dos dados, com recurso a uma mistura de quatro esteroides, verificando-se variações moderadas nos valores de δ 13C obtidos. Seguidamente, procurou otimizar-se alguns parâmetros intrínsecos à instrumentação com uma solução padrão de testosterona, obtendo-se uma menor variabilidade dos valores de δ 13C a mais baixa resolução do aparelho, contudo suficiente para uma completa separação dos isotopólogos da molécula. Finalmente, realizou-se uma análise comparativa da razão de isótopos estáveis de carbono de compostos padrão com e sem enriquecimento em 13C, verificando que os valores de δ13C calculados se encontravam distribuídos em intervalos distintos, sem ocorrer sobreposição. Como tal, o FT-ICR-MS apresenta-se como uma ferramenta promissora na distinção de esteroides biossintetizados daqueles de origem sintética.Anabolic androgenic steroids (AAS) are synthetic derivatives that mimic the effect of testosterone, allowing athletes to gain higher levels of muscle mass. In Portugal, Polícia Judiciária (PJ) and Laboratório de Análise de Dopagem (LAD) are the two entities responsible for monitoring these substances in seized and biological samples, respectively. However, detecting the abuse of these substances in biological samples presents an additional challenge, given that some anabolic steroids are also biosynthesized. The present work involved the identification of AAS in seized and biological samples. The main aims of this study were to identify AAS in seized products in Portugal, by Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS), as well as optimize the sample preparation methodology. Furthermore, to assess the suitability of Fourier Transform Ion Cyclotron Resonance Mass Spectrometry (FT-ICR-MS), able to fully resolve the isotopologues of a given molecule, in detecting AAS misuse, by measuring the 13C/12C isotopic ratio. An analysis was conducted on 51 samples suspected of containing AAS to identify any potential anabolic steroids present. A total of 75% of the samples were found to have a composition different from that stated on the label, and 17 different AAS were identified. Furthermore, 45% of the samples did not contain any anabolic steroids. Regarding the optimization of the sample preparation methodology, the chloroform/methanol (1:1) solvent mixture was found to have the highest affinity with the analytes under study. An initial study on data reproducibility was conducted in the FT-ICR-MS using a mixture of four steroids, which revealed moderate variations in the obtained δ 13C values. Subsequently, an optimization of specific intrinsic instrumentation parameters was performed using a testosterone standard solution, resulting in reduced variability in the δ13C values while maintaining a lower apparatus resolution that was nevertheless sufficient for a complete separation of the molecule’s isotopologues. Lastly, a comparative analysis was performed on the carbon stable isotope ratio of standard compounds, both enriched and unenriched in 13C. This analysis confirmed that the calculated δ13C values were distributed in distinct intervals with no overlap. Therefore, FT-ICR-MS emerges as a promising tool for distinguishing biosynthesized steroids from those of synthetic origin.porEsteroide anabolizante androgénico (EAA)DopingCromatografia em Fase Gasosa Acoplada à Espectrometria de Massa (GC-MS)Espetrometria de Massa de Ressonância Ciclotrónica de Ião com Transformada de Fourier (FT- ICR- MS)Razão isotópica 13C/12CTeses de mestrado - 2024master thesis203883039