Valério, Elisabete Maria PintoRebelo, Maria Teresa Ferreira Ramos Nabais de OliveiraAscenso, Ana Rita Santos2024-12-1120242024http://hdl.handle.net/10400.5/96246Tese de Mestrado, Biologia Humana e Ambiente, 2024, Universidade de Lisboa, Faculdade de CiênciasAs águas residuais hospitalares contêm diversos compostos químicos e biológicos, podendo conter por exemplo microrganismos oportunistas como Aspergillus fumigatus, Candida auris e Legionella pneumophila. A. fumigatus e C. auris são considerados pela Organização Mundial de Saúde como fungos de elevada criticidade devido à sua patogenicidade e resistência a antifúngicos. L. pneumophila origina patologias como a doença do Legionário e infeções respiratórias, desencadeando surtos globais. O trabalho desenvolvido nesta dissertação visa detetar os microrganismos já mencionados em águas residuais hospitalares e, em afluentes e efluentes das respetivas Estações de Tratamento de Águas Residuais (ETAR) na área de Lisboa, no âmbito do Plano de Ação para a Gestão das Águas Industriais Residuais (AgIR). Foram analisadas 52 amostras, distribuídas por duas campanhas de amostragem em outubro/novembro/2023 e abril/maio/2024. A metodologia aplicada consistiu na filtração, inoculação e isolamento das amostras em meio de crescimento apropriado, com observação de parâmetros microscópicos e macroscópicos. Paralelamente foi extraído DNA a partir das amostras de água e, das placas de crescimento de espécies fúngicas. O DNA extraído foi submetido a PCR Real-Time (qPCR). Como método alternativo foi adotado o procedimento de sequenciação da região ITS do DNA ribossomal (rDNA) para a identificação molecular dos isolados de algumas amostras. Nas duas campanhas de amostragem foram detetadas/identificadas as três espécies em estudo, sendo C. auris detetada pela primeira vez em águas residuais no país, apesar de ausência de casos clínicos de infeção conhecidos neste período. Foi demonstrado que estas espécies são também detetadas em afluentes e efluentes de ETAR, indicando a potencial disseminação destes microrganismos para o ambiente. Estes resultados demonstram a importância da monitorização das águas residuais hospitalares e ETAR na vigilância ativa da disseminação destas espécies com especial interesse na Saúde Pública, auxiliando as unidades de saúde na implementação de medidas de prevenção e mitigação.Hospital wastewater contains various chemical and biological compounds, including opportunistic microorganisms such as Aspergillus fumigatus, Candida auris, and Legionella pneumophila. A. fumigatus and C. auris are considered by the World Health Organization to be fungi of high criticality due to their pathogenicity and resistance to antifungals. L. pneumophila causes diseases such as Legionnaire’s disease and respiratory infections, causing global outbreaks. This dissertation aims to detect the aforementioned microorganisms in hospital wastewater, as well as in the influents and effluents of the respective Wastewater Treatment Plants (WWTP’s) in the Lisbon area, as part of the Action Plan for the Management of Industrial Wastewater. Fifty-two samples were analyzed, distributed across two sampling campaigns in October/November 2023 and April/May 2024. The methodology applied consisted of filtration, inoculation, and isolation of the samples in appropriate growth media, with observation of microscopic and macroscopic parameters. DNA was also extracted from the water samples and from the fungal species growth plates. The extracted DNA was subjected to qPCR. As an alternative method, the ITS region of rDNA was sequenced for the molecular identification of isolates from some samples. In the two sampling campaigns, all three species under study were detected/identified, with C. auris being detected for the first time in wastewaters in the country, despite the absence of known clinical infection cases in this period. It was demonstrated that these species are also present in WWTP influents and effluents, indicating the potential for dissemination of these microorganisms into the environment. These results highlight the importance of monitoring hospital wastewater and WWTP’s in the active surveillance of the spread of these species, which is of particular interest to public health by assisting health units in implementing preventive and mitigation measures.porÁguas Residuais HospitalaresCandida aurisAspergillus fumigatusLegionella pneumophilaqPCRTeses de mestrado - 2024master thesis203879279