Deteção de hemozoína em eritrócitos infetados com Plasmodium falciparum por citometria de fluxo, para monitorização do efeito de antimaláricos

Abstract

Plasmodium falciparum é a mais mortal das cinco espécies de Plasmodium que causam malária humana. A propagação deste parasita resistente a quase todos os antimaláricos disponíveis é um assunto fulcral e requer a monitorização da sua suscetibilidade aos diferentes antimaláricos. Atualmente estão disponíveis diferentes testes in vitro para a avaliação da atividade dos antimaláricos, tais como a observação microscópica do desenvolvimento do parasita em eritrócitos, ensaios isotópicos e quantificação de proteínas do parasita. Infelizmente todos estes ensaios apresentam desvantagens quanto ao custo, tempo e dificuldade de execução. O parasita da malária durante o seu desenvolvimento intra-eritrocítico, produz quantidades crescentes de um cristal denominado hemozoína, que pode ser usado como um indicador de maturação. A hemozoína tem a capacidade de despolarizar a luz, consequentemente a despolarização da luz pode ser detetada por métodos óticos como a citometria de fluxo. Para isso, fez-se uma simples adaptação de um citómetro de fluxo de forma a detetar a luz despolarizada, permitindo deste modo a deteção de eritrócitos infetados por P. falciparum. Foram testados diferentes fármacos antimaláricos, em culturas de sangue humano infetado com estirpes de Plasmodium falciparum sensível e resistente à cloroquina. O teste permitiu detetar a maturação do parasita em tempo real, o efeito inibitório de todos os fármacos testados, à exceção da pirimetamina, e ainda a resistência à cloroquina, em apenas 24 horas. A deteção por citometria de fluxo da despolarização resultante da presença de hemozoína, permitiu desenvolver um teste de sensibilidade alternativo, de fácil execução, que exige pouco equipamento, sem a necessidade de adição de reagentes e produz resultados rápidos e fiáveis.