Piroplasmose equina : diagnóstico molecular e avaliação de alterações hematológicas e de biomarcadores inflamatórios em cavalos com doença clínica e subclínica

Abstract

Atualmente, o PCR quantitativo (qPCR) constitui o teste de eleição para diagnóstico de infeções por Theileria equi e Babesia caballi. O papel dos marcadores da inflamação na piroplasmose equina (PE) permanece pouco estudado, não só no diagnóstico e monitorização mas também enquanto potenciais indicadores preditivos da doença. Tendo em conta a natureza intracelular obrigatória dos agentes da PE, colocou-se a seguinte hipótese: a resposta inflamatória na PE difere da de outras doenças associadas a inflamação. Além disso, procurou responder-se às seguintes questões: 1) Qual a utilidade do hemograma e marcadores de inflamação aguda no diagnóstico precoce da PE? 2) Quais as vantagens da utilização do qPCR no diagnóstico da PE? Os principais objetivos deste estudo foram: 1) Caracterizar e quantificar alterações do hemograma, proteínas totais, amilóide sérica A (SAA), fibrinogénio e ferro plasmáticos na PE; 2) Comparar os resultados obtidos entre cavalos com doença clínica (grupo PC) e subclínica (grupo SC); 3) Avaliar o valor diagnóstico destes testes para a PE clínica e outras causas de febre de origem inespecífica (grupo NS); 4) Determinar a carga parasitária em amostras positivas e comparar a sensibilidade da microscopia ótica, considerando os resultados obtidos por diagnóstico molecular. Cada amostra foi submetida a qPCR para deteção de T. equi e B. caballi, análise hematológica, doseamento de proteínas totais, SAA, fibrinogénio e ferro plasmáticos. Foram identificadas diferenças significativas (p < 0,05) no valor absoluto de monócitos entre os grupos PC-NS e PC-SC, na SAA entre os grupos PC-SC e no ferro plasmático entre os grupos PC-NS e PC-SC. 75% dos cavalos do grupo SC apresentaram neutrofilia sem desvio à esquerda. Apenas foram observadas formas de T. equi em esfregaços sanguíneos de cavalos com parasitémia igual ou superior a 7,2x10 2 parasitas/μL. Este estudo evidenciou não só as vantagens do qPCR no diagnóstico da PE, mas também que esta doença se caracteriza por uma resposta inflamatória associada a alterações do hemograma e de marcadores inflamatórios, em que o valor absoluto de monócitos, SAA e ferro plasmático constituíram os biomarcadores mais sensíveis para a deteção da doença.

ABSTRACT - EQUINE PIROPLASMOSIS: MOLECULAR DIAGNOSIS AND EVALUATION OF HEMATOLOGICAL AND INFLAMMATORY BIOMARKERS CHANGES IN HORSES WITH CLINICAL AND SUBCLINICAL DISEASE - Currently, real-time PCR (qPCR) is considered the best technique to diagnose Theileria equi and Babesia caballi infections. Furthermore, the role of inflammatory biomarkers in equine piroplasmosis (EP) is still not clear, not only for diagnostic and monitoring purposes but also for its use as disease predictive indicators. Considering the obligate intracellular nature of EP agents, the following hypothesis was set: the inflammatory response in EP differs from other inflammatory diseases. Moreover, the following questions were asked: 1) What is the usefulness of hemogram and acute inflammation markers in the early detection of EP?; 2) What are the advantages of using qPCR to diagnose EP? The main goals of this study were: 1) To define and quantify changes in hemogram, total proteins, serum amyloid A (SAA), plasma fibrinogen and plasma iron in horses with EP; 2) To compare the obtained results between horses with clinical (PC group) and subclinical disease (SC group); 3) To evaluate the diagnostic value of hemogram and inflammation markers for EP and other causes of unknown origin fever (NS group); 4) To calculate the parasitemia in EP positive horses and compare the sensitivity of optic microscopy, considering the molecular diagnosis results. Each sample was subjected to a qPCR for T. equi and B. caballi detection, hematological analysis and determination of total proteins, SAA, plasma fibrinogen and plasma iron. There were significant differences (p < 0,05) in monocytes absolute value between PC-NS and PC-SC groups, in SAA between PC-SC groups and in plasma iron between PC-NS and PC-SC groups. A total of 75% SC group horses showed neutrophilia without left shift. T. equi was only found in blood smears that had a parasitemia equal or higher than 7,2x10 2 parasites/μL. This study highlights the usefulness of qPCR in EP diagnosis and that this disease is characterized by an inflammatory response associated with hemograma and inflammatory markers changes, in which monocytes absolute value, SAA and plasmatic iron demonstrate higher sensitivity in the detection of EP.