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Abstract(s)
Neste trabalho foi estudado o papel das topoisomerases celulares (I, IIα e IIβ) na
replicação, usando os adenovírus como modelo. Os adenovírus apresentam um genoma de ADN
de cadeia dupla e são responsáveis por infecções respiratórias, gastro-intestinais,
oftalmológicas, neurológicas e genito-urinárias. São organismos ubiquitários, infectam passáros
e a maioria dos mamíferos, incluindo o Homem. Com efeito, a importância destes vírus tem
vindo a aumentar por surgirem associados a novos quadros nosológicos (imunodeficiências,
transplantes de órgãos) e por poderem vir a funcionar como vectores terapêuticos em doenças
genéticas e na viroterapia do cancro. No presente trabalho (1) analisámos a distribuição das
topoisomerases I, IIα e IIβ no núcleo de células infectadas, com utilização de tecnologias
modernas de microscopia, (2) caracterizámos funcionalmente os locais de acumulação destas
enzimas, (3) testámos se a replicação e a transcrição virais eram necessárias ao seu
recrutamento, (4) estudámos a dinâmica das topoisomerases I e IIα in vivo por FRAP, (5)
realizámos a analise mutacional da topoisomerase I e (6) quantificámos as concentrações e
actividades catalíticas das topoisomerases antes e depois da infecção. Por fim, (7) abordámos a
conexão funcional entre estas proteínas celulares e a replicação do vírus por depleção selectiva
de cada topoisomerase (siRNA), evitando os efeitos genotóxicos dos fármacos antitopoisomerase.
Os resultados obtidos permitem concluir que ambos os tipos de topoisomerases (I e II)
são utilizados pelo adenovírus durante a sua replicação, mas que o seu papel é diferencial, com
relevo inesperado para as topoisomerases IIα e IIβ. Estes resultados sugerem que as
topoisomerases poderão ser potenciais alvos na terapêutica de patologias infecciosas e
potenciais factores preditivos na terapêutica viral do cancro.
Description
Projectos de Investigação no âmbito dos quais o trabalho foi realizado:2001/05 - Cell biology of human topoisomerase IIα (Fundação para a Ciência e a
Tecnologia – Programa Operacional Ciência, Tecnologia e Inovação/BCI/36194/2000. 2005/07 - Topoisomerases: at the border between DNA replication and chromatin
structure (Fundação para a Ciência e a Tecnologia – Programa Operacional de Ciência e
Inovação/BIA-BCM/63368/2004)
Tese de Doutoramento em Ciências Veterinárias
Tese de Doutoramento em Ciências Veterinárias
Keywords
Topoisomerases celulares Adenovírus Replicação genómica Cancro Cellular topoisomerases Adenovirus Genome replication Cancer
Pedagogical Context
Citation
Publisher
Universidade Técnica de Lisboa. Faculdade de Medicina Veterinária