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Publicação
Distribuição nuclear, dinâmica e função das topoisomerases I, IIα e IIβ na replicação de genomas : estudo experimental no adenovírus serótipo 2-
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Orientador(es)
Resumo(s)
Neste trabalho foi estudado o papel das topoisomerases celulares (I, IIα e IIβ) na
replicação, usando os adenovírus como modelo. Os adenovírus apresentam um genoma de ADN
de cadeia dupla e são responsáveis por infecções respiratórias, gastro-intestinais,
oftalmológicas, neurológicas e genito-urinárias. São organismos ubiquitários, infectam passáros
e a maioria dos mamíferos, incluindo o Homem. Com efeito, a importância destes vírus tem
vindo a aumentar por surgirem associados a novos quadros nosológicos (imunodeficiências,
transplantes de órgãos) e por poderem vir a funcionar como vectores terapêuticos em doenças
genéticas e na viroterapia do cancro. No presente trabalho (1) analisámos a distribuição das
topoisomerases I, IIα e IIβ no núcleo de células infectadas, com utilização de tecnologias
modernas de microscopia, (2) caracterizámos funcionalmente os locais de acumulação destas
enzimas, (3) testámos se a replicação e a transcrição virais eram necessárias ao seu
recrutamento, (4) estudámos a dinâmica das topoisomerases I e IIα in vivo por FRAP, (5)
realizámos a analise mutacional da topoisomerase I e (6) quantificámos as concentrações e
actividades catalíticas das topoisomerases antes e depois da infecção. Por fim, (7) abordámos a
conexão funcional entre estas proteínas celulares e a replicação do vírus por depleção selectiva
de cada topoisomerase (siRNA), evitando os efeitos genotóxicos dos fármacos antitopoisomerase.
Os resultados obtidos permitem concluir que ambos os tipos de topoisomerases (I e II)
são utilizados pelo adenovírus durante a sua replicação, mas que o seu papel é diferencial, com
relevo inesperado para as topoisomerases IIα e IIβ. Estes resultados sugerem que as
topoisomerases poderão ser potenciais alvos na terapêutica de patologias infecciosas e
potenciais factores preditivos na terapêutica viral do cancro.
Descrição
Projectos de Investigação no âmbito dos quais o trabalho foi realizado:2001/05 - Cell biology of human topoisomerase IIα (Fundação para a Ciência e a
Tecnologia – Programa Operacional Ciência, Tecnologia e Inovação/BCI/36194/2000. 2005/07 - Topoisomerases: at the border between DNA replication and chromatin
structure (Fundação para a Ciência e a Tecnologia – Programa Operacional de Ciência e
Inovação/BIA-BCM/63368/2004)
Tese de Doutoramento em Ciências Veterinárias
Tese de Doutoramento em Ciências Veterinárias
Palavras-chave
Topoisomerases celulares Adenovírus Replicação genómica Cancro Cellular topoisomerases Adenovirus Genome replication Cancer
Contexto Educativo
Citação
Editora
Universidade Técnica de Lisboa. Faculdade de Medicina Veterinária