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Apoptose induzida por diferentes tipos de virus influenza
Publication . Santos, Luis André Cruz dos, 1982-; Andrade, Helena Rebelo de, 1962-; Rodrigues, Cecília M. P., 1968-
A gripe é uma doença provocada pelo vírus influenza, anualmente responsável por provocar epidemias sazonais com elevadas taxas de morbilidade e mortalidade. O vírus influenza tem a capacidade de interagir com mecanismos celulares do hospedeiro de modo a tornar mais eficiente o seu ciclo replicativo. Um dos mecanismos estudados, nos vírus influenza do tipo A, nos últimos anos, é a morte celular por apoptose. No entanto, os vírus influenza do tipo B não foram incluídos na maioria destes estudos, deixando uma lacuna no conhecimento nesta temática. Neste estudo, foram seleccionadas, por caracterização genética, duas estirpes representativas de vírus influenza do tipo A e do tipo B, depois utilizadas na infecção de células MDCK-SIAT1 no estudo da apoptose, através de ensaios de libertação da enzima lactato desidrogenase, coloração de Hoechst, actividade das caspases, análise de expressão de proteínas e transfecção de genes virais. Os resultados obtidos apontam para uma diferença nos perfis de indução da apoptose entre a infecção com vírus influenza do tipo A e do tipo B. Enquanto os vírus influenza do tipo A induzem a apoptose numa fase tardia da infecção, maioritariamente pela via intrínseca, os vírus influenza do tipo B induzem a apoptose numa fase inicial da infecção, recrutando as vias intrínseca e extrínseca. Os resultados revelaram, a nível celular, a via do IκB/NF-κB, e a nível viral, os genes M e NS na inibição da apoptose nos vírus influenza do tipo A bem como os genes PB2, PB1 e PA na indução da apoptose nos vírus influenza do tipo B, como possíveis responsáveis das diferenças observadas no perfil de apoptose. A compreensão das interacções vírus-hospedeiro é essencial, nos vírus influenza do tipo A e nos do tipo B, pois permite a identificação de componentes virais e/ou celulares que afectam a replicação viral e podem ser utilizados no estudo de novos alvos terapêuticos.
Genetic evolution of PB1 in the zoonotic transmission of influenza A(H1) virus
Publication . Giria, Marta; Rebelo-de-Andrade, Helena
The epidemiology of human infection with swine-origin influenza A(H1) viruses suggests that the virus must adapt to replicate and transmit within the human host. PB1 is essential to the replication process. The objective of this study was to identify whether PB1 retains genetic traces of interspecies transmission and adaptation. We have found that the evolutionary history of PB1 is traceable. Lineage appears to be distinguished by amino acid changes between the conserved motifs of the viral polymerase, which can have major impact in PB1 protein folding, and by changes in the expression of the Mitochondrial Targeting Sequence and in the predicted helical region, that putatively affect induction of cellular apoptosis by PB1-F2. Furthermore, we found genomic markers that possibly relate to viral adaptation to new hosts and to new cellular environment and, additionally, to an enhanced compatibility with HA. We found no specific trend in the amino acid substitutions. Viral fitness appears to be favored by less reactive amino acids in some positions, while in others more reactive ones are fixed. Also, more flexible conformations appear associated with higher protein stability in general, although often more restrictive conformations appear to have favored protein folding and binding. Several aspects of PB1 mapping domains and the specific roles and interaction of PB1, PB1-F2 and N40 with each other and with other viral proteins and host cellular molecules remain unclear. Tracing the genetic evolution is critical to further understand the mechanisms by which PB1 affects vital fitness and adaptation. This analysis now permits putative adaptive related polymorphisms to be experimentally evaluated for phenotypic impact.
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Fundação para a Ciência e a Tecnologia
Programa de financiamento
3599-PPCDT
Número da atribuição
PTDC/SAU-MIC/122780/2010