A carregar...
Projeto de investigação
Sem título
Financiador
Autores
Publicações
Um novo sistema de clonagem baseado na lipoproteína OprI para obtenção de formulações imunogénicas derivadas da parede celular bacteriana
Publication . Basto, Afonso Silva Pinto; Leitão, José Alexandre da Costa Perdigão e Cameira; Martins, Carlos Manuel Lopes Vieira
A modulação de imunidade específica por conjugação de antigénios com ligandos de receptores de reconhecimento de padrão (PRR) constitui uma estratégia emergente para o desenvolvimento de vacinas subunitárias. Neste trabalho, desenvolve-se um novo sistema de clonagem em Escherichia coli para expressão de antigénios em fusão com a lipoproteína OprI, um ligando TLR da membrana externa de Pseudomonas aeruginosa. O sistema permite um controlo apertado da expressão proteica e a purificação por cromatografia de afinidade com iões metálicos, ultrapassando as principais limitações de versões anteriores. Confirmou-se o processamento, translocação e triacilação da lipoproteína e desenvolveram-se protocolos para a produção de outras formulações recombinantes derivadas da parede bacteriana (fragmentos e vesículas de membrana externa) com potencial distinto para activação PRR. Como modelo, clonaram-se as sequências dos antigénios A104R do vírus da peste suína africana (VPSA), ovalbumina e EGFP. Demonstrou-se a capacidade adjuvante das três formulações, avaliando a resposta humoral e a indução de linfócitos T CD8+ in vivo e o perfil de citocinas e quimiocinas induzidas em células dendríticas estimuladas in vitro. Os resultados observados validam o sistema para a obtenção de formulações imunogénicas com aplicação no desenvolvimento de vacinas subunitárias experimentais e em estudos de modulação de resposta adaptativa.
Unidades organizacionais
Descrição
Palavras-chave
Contribuidores
Financiadores
Entidade financiadora
European Commission
Programa de financiamento
FP7
Número da atribuição
211691